实验十、细胞系的传代培养.pptVIP

细胞系的维持培养 提纲 一、传代培养原理 ( What ？ Why？ When？) 二、传代培养的过程 ( How ?) 三、实验操作 一、传代培养原理 （一）什么是传代培养？ 当原代培养的细胞增殖到一定的密度后，将其从原培养容器中取出，按照一定的比例向另外一个或者多个容器中所进行的再培养，简称传代。 （二）为什么要进行传代培养？ 1.细胞充满培养空间； 2.细胞相互接触，停止生长——接触抑制； 3.传代处理可以淘汰培养物中比例不大的细胞类型，达到纯化细胞类型的目的； （三）什么时候需要进行传代？ 观察培养物是否已经基本长满培养瓶的生长面，一般来说如果没有达到80％，不要急于传代，对于首次传代的培养物更是如此。 二、怎样进行传代培养? 简而言之，就是将培养物分成小的部分，重新接种到另外的培养器皿内，继续培养。 该过程称为传代（passage）或者 再培养（subculture）。 本质：分割一次再培养；对培养物进行分割和稀释。 本次实验操作 实 验 步 骤 1.吸除培养瓶内旧的培养基； 2.向瓶内加入胰蛋白酶溶液1ml，于室温或37℃下消化1.5min，用肉眼或者倒置显微镜观察消化状态，细胞层上出现针孔状斑或者镜检发现细胞变圆回缩，即可吸去消化液； 3.加入2-3ml培养液，用吸管吹打细胞，使其脱落（可以适当振荡）； 6. 将细胞传入两个培养瓶中，并向新瓶补加2-3ml培养液。 7. 盖好培养瓶盖。 8. 放置于培养箱中，37℃培养。 消化效果影响因素： 温度、消化适度。 HeLa细胞的扫描电镜观 细胞培养的结果观察与鉴定 其他说明 霉菌一般红、清，初期只有菌丝，没有霉斑。 放线菌、酵母菌污染。 细胞初期呈三角形，后呈长梭形。 胞体大而透明，说明生长情况良好，反之，则说明培养条件不佳或细胞已经衰老。 黄、清——培养基的更换。 * 一、传代培养原理 未污染 污染 组织边缘细胞迁移、细胞长梭形、连片 黄、清、 生长晕、 连片铺瓶 生长 组织边缘无迁移 红、清 未生长 大量菌丝 霉斑 霉菌 大量小粒、杆 黄、混 细菌 显微镜观察 肉眼观察 *