APJ拮抗剂Apelin13(F13A)对肝纤维化小鼠肝脏TGF-β1表达的影响.docVIP

精品论文 参考文献 APJ拮抗剂Apelin13(F13A)对肝纤维化小鼠肝脏TGF-β1表达的影响 肖四海 龙海燕 谭华清(通讯作者) 　　（南华大学附属娄底医院lt;娄底市中心医院gt; 湖南娄底 417000） 　　【摘要】目的:观察血管紧张素受体ATI相关的受体蛋白（APJ）拮抗剂Apelin13(F13A)对肝纤维化大鼠肝功能的保护作用及其作用机制。方法:30只雄性SD大鼠随机分为对照组、肝纤维化模型组和Apelin13(F13A)（75mu;g/kg）处理组。采用四氯化碳（CCl4）诱导大鼠肝纤维化模型。Apelin13(F13A)通过皮下注射给药。检测肝功能和血清转化生长因子-beta;1（TGF-beta;1）水平。采用实时定量PCR和Westernblot检测肝脏中TGF-beta;1的表达。结果:与模型组比较，Apelin13(F13A)处理显著降低了大鼠血清ALT、AST和TGF-beta;1的水平，增加了血清ALB水平，降低了大鼠肝脏组织TGF-beta;1mRNA和蛋白的表达。结论:APJ拮抗剂Apelin13(F13A)保护了肝纤维化大鼠的肝功能，其机制可能与Apelin13(F13A)降低TGF-beta;1的表达有关。 　　【关键词】Apelin 肝纤维化 肝功能 　　【中图分类号】R575 【文献标识码】A 【文章编号】1672-5085（2014）23-0082-03 　　肝纤维化是很多慢性肝病的共同病理生理学基础，也是肝硬化发生发展过程中的一个必经阶段。肝纤维化主要是细胞外基质蛋白包括胶原等降解相对不足，过度沉积引起的。转化生长因子beta;1（transforming growthfactor beta;1, TGF-beta;1）是导致细胞外基质沉积，启动和形成肝纤维化重要的刺激因子[1]。Apelin由Tatemoto等从牛胃的分泌物中分离并提取出的G蛋白耦联受体血管紧张素受体AT1相关的受体蛋白（putative receptor protein related to the angiotensinreceptor ATl，APJ）的天然配体。研究发现血浆中Apelin的水平是肝纤维化进展的标志物，Apelin/APJ系统参与肝脏疾病的发生，Apelin/APJ系统的激活促进肝纤维化的发展[2]。而APJ的阻断是否能抑制肝纤维化和保护肝功能及机制，目前还不清楚。因此本研究拟观察APJ拮抗剂 Apelin13 (F13A)对肝纤维化大鼠肝功能的保护作用，并从TGF-beta;1角度探讨Apelin13 (F13A)保护肝纤维化大鼠肝功能的可能机制。 　　1 材料和方法 　　1.1材料 　　APJ拮抗剂Apelin13 (F13A)为美国Sigma公司产品。四氯化碳CCl4购自汕头西陇化工厂，临用前用石蜡油1:1稀释。谷丙转氨酶（alanine transaminase, ALT），谷草转氨酶（aspartate transaminase, AST）和白蛋白（albumin, ALB）检测试剂盒为南京建成生物工程公司产品。TGF-beta;1 ELISA法检测试剂盒为上海森雄科技实业有限公司产品。 　　1.2实验动物 　　健康SPF级雄性SD大鼠30只，6周龄，体质量200-220g，由南华大学实验动物学部提供。 　　1.3 实验方法 　　1.3.1实验分组和动物模型制备 　　30只SD大鼠随机分为3组，每组10只，分别为正常组、模型组和Apelin13 (F13A)处理组。模型组和Apelin13 (F13A)处理组给予40% CCl4的石蜡油（0.1 mL/kg）腹腔注射，每周2次，共进行8周；对照组腹腔注射石蜡油（0.1 mL/kg）。将Apelin13 (F13A)溶解于生理盐水，Apelin-13处理组大鼠在进行CCl4腹腔注射的当天给予Apelin13 (F13A)（0.1 mg/kg）腹腔注射，其他则给予等量生理盐水腹腔注射，每2天1次，共进行8周。 　　1.3.2肝功能和血清TGF-beta;水平的检测 　　实验进行到第8周末，将大鼠麻醉后，处死大鼠，心脏放血，分离血清，用全自动生化检测仪检测血清ALT，AST和白蛋白(ALB)水平，按试剂盒说明进行操作。采用ELIsA法检测血清TGF-beta;1的水平。 　　1.3.3实时定量PCR 　　实验进行到第8周末，将大鼠麻醉后，心脏放血处死大鼠，迅速取出大鼠肝脏，取适量肝脏组织制备组织匀浆。按说明书应用TTrizol提取总RNA。进行逆转录反应，合成cDNA第一链。取cDNA样品梯度稀释，进行