应用TaqManMGB探针进行松材线虫的实时荧光定量检测技术研讨.pdfVIP

植物病理学报 ACTAPHYTOPATHOLOGICASINICA 35(6)(ZK)：52-58(2005) 应用TaqMan—MGB探针进行松材线虫 的实时荧光定量检测技术研究 葛建军h，曹爱新1，刘先宝2，陈长法3 (1中国检验检疫科学研究院，北京100029，2华南热带农业大学，海南571737，3山东出入境检验检疫局，青岛266002) 摘要：松材线虫是国际公认的最重要的检疫性有害生物之一，也是我国2类检疫危险性有害生物，我国口岸多次从货物的 木质包装中截获该线虫。由于松材线虫与拟松材线虫在形态上极其相似，难以区分，幼虫更无法用于鉴定。传统的形态学 鉴定、生化以及其他分子技术等方法存在费时、准确度不高、灵敏度低等缺点，不易形成标准。我们设计筛选一对引物以及 一条MGB探针，对松材线虫进行实时荧光PCR检测。建立了一条从lpg到104pg标准曲线，相关系数r=0．965。该检测 方法省时、准确、快速、无污染。 关键词：定量检测；松材线虫；MGB；核糖体ITS of with GEJian— QuantityassayBursaphelenchusxvlophilusTaqMan—MGBprobe Chinese of and junl，CAOAi-xinl，LIUXian—ba02，CHEN(1 AcademyQuarantine Chang—fa3 Inspection，Beijing SouthChina of and Bu— 100029，China；2 UniversityTropicAgriculture，Hmnan571737，China；3ShandongInspectionQuarantine reau，Qingdao266002，China) wood ofthemost in Abstract：Pine xylophilus)，one nematode(Bursaphelenchus importantquarantinepests the list to for the alsoin concerned ofChina it hundredstimesfrom world，is A2 China．Entryport intercepted wood of toits with materials packaging goods．DuemorphologicalsimilarityBursaphelenchusmucronatus，it is to itfrom to and methods difficultydistinguishB．mucronatus．Manyattemptsdevelopdetectingdiagnosing for hadbeen biochemical andmolecular Bursaphelenchusxylophilus conducted，includingtechnology technology． weretime andinstable．Areal—time chainreactionmethod However，thoseconsuming quantitati