木薯淀粉分支酶基因克隆及反义表达载体的构建.pdfVIP

No．3 第29卷第3期 热带作物学报 V01．29 2008年6月 CHINESE OFTROPICALCROPS Jun．2008 JOURNAL 木薯淀粉分支酶基因克隆及反义表达载体的构建 余 洁 郭运玲 郭安平‘孔 华 刘恩平 贺立卡 } 中国热带农业科学院热带生物技术研究所海口 571101 摘 要 利用l盯一PCR方法，用木薯块根cDNA做模板克隆获得支链淀粉合成的关键酶基因船肼，经序列 反义结构的植物表达载体。 关键词木薯船叫基因基因克隆反义表达载体 中图分类号S533 木薯(肘硫i砌t 重的75％～85％，是热带、亚热带重要的粮食作物和能源植物…。目前，国家制定的“十一五”再生能源 发展战略，以及新颁布的囝家可再生能源法中，将玉米、木薯和甘蔗列入未来生产燃料酒精的主要原 料。提高木薯单产和鲜薯淀粉含量，改良加工型木薯淀粉品质将是研究的重点和热蒯21，而对木薯淀粉 相关基因的研究也变得尤为重要了。淀粉是木薯块根的主要成分，按结构差异可分为直链淀粉和支链 淀粉，而直／支的比例影响着淀粉粒的结构和特点f3】。淀粉分支酶(Starchbmching 伸的SBE称其为SBEI，有C端多肽延伸的SBE称其为SBE 表达量相对较高，而SBEII在较晚时期表达。据Sadequr IⅢA干扰技术抑制SBEII基因的表达，能有效的抑制支链淀粉的合成，从而提高直链淀粉。近年来，在 玉米、水稻上用RNA干扰技术降低支链淀粉含量而提高直链淀粉含量均有成功的报道【10~1¨，而在木薯 上的应用尚未见报道。分离克隆淀粉合成相关基因的工作是阐明淀粉合成机理以及利用基因工程技术 改良木薯淀粉品质的基础，具有重要的理论和实践意义。为此，本研究利用RT．PcR技术，克隆木薯淀粉 分支酶基因，构建其反义表达载体，为进一步利用基因工程技术改良木薯品质奠定基础。 1材料与方法 1．1材料 d以上的木薯块 1．1．1试验材料选取在中国热带农业科学院热带生物技术研究所种植基地生长360 根作样品。取样后迅速放入液N：中冷冻后一70℃保存备用。 1．1．2 崩粒及菌种 室提供。bMDl9一Tvector购自TaKaRa公司。 1．1．3 RevenAidTMFirstS舰ndcDNA RNA 试 剂 kit购自Ta勋Ra公司，PlantReagem址购 Synthesis 自天根公司，T4DNA连接酶、限制性内切酶和DNA 纯。人工寡核苷酸引物由大连宝生物公司合成。 子育种”资助。 。 余洁女，1983年生，在读研究生。研究方向：农业生物技术。E—mail：83yu@163．渤。 ‘通讯作者 郭安平，E—mail：gap211@126．com，电话：0898 收稿日期：2008—02一17修回日期：2008一04—13 3期 余囊暨}；囊婆簖篓羹疆鹱鬟囊薹笺耋醪蟊 339 薹i2。4蓄蓁薹万毒薹希搦撼跸iil辅婴蓁垂雾捌薹飕蕊噬羹薹睡氟矧美；蠹崩数踔储掘i}i霞囊直；丽 cm；霪25 燮攀30 cm门墁錾氨R舶塑誊薹薷m而500 g硒薹燮蓁委霪蓁薹耋羹耋攀蓁蓁羹霎薹萋薹羹 鬻饕伺嗍霎蠢蓁萋；囊薹垂蓁羹妻雾羹萎薹萎i垂霪季疆薹鞠扑防珥临篓萋耋蓁爵霎臻；载鍪篓薹cm 引粪蒿。攀套一薹霎藤弱符旨囊二量cm震￡函弑酎；萎篓mL曼譬酸墅；薹耄雾篓薹霎雾篓蠢藕柱霉商提供 昀薅明币守的方i去i!斟丽?济篓荫霆氤塞委菱一【】固蓁i}l霎奏鬻穗饺碌；錾酗腻笞12h／dj丽鍪蕊墼i一翼d 萎蓁霎蓁篓。霎蓁羹蓁薹釜蚕；i曼j羹