黄牛肝菌凝集素的化学修饰与荧光光谱研究.pdfVIP

2015年 5月 四川大学学报 (自然科学版) M ay．2015 第 52卷 第 3期 JournalofSichuanUniversity (NaturalScienceEdition) Vo1．52 No．3 doi：103969／j．issn．0490—6756．2015．03．033 黄牛肝菌凝集素的化学修饰与荧光光谱研究 王 楠，祁 伟 ，周 立，鲍锦库 (四川大学生命科学学院，成都 610064) 摘 要 ：对黄牛肝茵凝集素 (Boletusfulvuslectin，BFL)进行氨基酸化学修饰 ，结果表 明， Trp残基、Tyr残基及 Ser／Thr残基的修饰都会对 BFL的凝血活性产生影响，表明这些残基 是 BFL凝血活性所必需的，可能参与了其凝血活性 中心的构成．而Arg残基修饰后 ，BFL的 凝血活性未发生改变，表 明Arg不是维持 BFL凝血活性的必需基 团．内源荧光光谱分析结 果表明，BFL所发射的荧光是 由Trp残基贡献的，且 Trp残基在 BFL分子 中所处的微环境 极性较弱 ，屏蔽于一定的构 象当中．温度 、pH 值及变性剂对 BFL 内源 荧光光谱 的影响与基 本理化性质的实验结果一致．氨基酸修饰对荧光光谱的影响表 明，Trp残基修饰会 引起 BFL 内源荧光光谱较大变动 ，而 Tyr、Ser／Thr残基修饰对 BFL 内源荧光光谱影响不大． 关键词 ：黄牛肝茵凝集素 ；化学修饰；荧光光谱 ；凝血活性 ；构象 中图分类号 ：Q51 文献标识码 ：A 文章编号：0490—6756(2o15)o3—0657—06 ChemicalmodificationandfluorescenceanalysisoflectinfromBoletusfulvus WAlNG Nan，QIW i，ZH0ULi，BA0Jin-KU (CollegeofLifeSciences，SiehuanUniversity，Chengdu610064，China) Abstract：Chemica1modificationOfaminoacidresiduesO Boletusfulvuslectin(BFL)showedthattrea— tingpurifiedBFLwithamino—acid—modifyingreagentsspecificforTrp，TyrandSer／Thrcouldaffectthe hemagglutinationactivityofBFL．Theseresultsindicated thattheseresiduesplayed importantrolesin thehemagglutinationactivityofBFL，andmightbeessentialforconstitutingtheactivecenterofBFL， whereasArgmightnotbeessentialforconstitutingtheactivecenterofBFL．Moreover，thefluores- cencespectrum ofnativeBFLsuggestedthatTrpresiduesmadegreatcontributiontOthefluorescenceof BFL，andtheymightlocateinthehydrophobicmieroenvironmentofBFLandbeburiedinthehydropho- biccoreofthelectin．Theinfluencesoftemperature。PH anddenaturantsonthefluorescencespectrum ofBFL wereconsistentwith thehemagglutination assays．Theexperimentofaminoacidmodification suggestedthatmodification ofTrp significantly affected the fluorescence