近红外荧光电泳迁移率变动分析的实验方法.pdfVIP

生 物 技 术 通 讯 LETTERS IN B10IECHN0L0GY Vo1．22No．1Jan．，2011 doi：10．3969~．issn．1009—0002．2011．O1．017 研究报告 近红外荧光电泳迁移率变动分析的实验方法 高婧，刘颖勋，王进科 东南大学 生物电子学国家重点实验室，生物科学与医学工程学院生物技术与材料实验 中心，江苏 南京 210096 [摘要】 目的：分析最新近红外荧光标记(NIRF)电泳迁移率变动分祈(EMSA)技术的优缺点，在此基础上对NIRF— EMSA技术进行实验方法的改进。方法 ：设计 了3种NIRF—EMSA实验方法 ，即扫胶法、染胶法和扫膜法 ，通过实验 比 较 了3种方法的实验程序复杂性、优缺点及检测成本 ，并将 3种方法与化学发光EMSA进行 了比较。结果：采用3种 方法都可以取得 良好的EMSA检测效果，但 比较而言，间接扫膜法不仅效果 良好，而且实验成本最低。结论 ：间接扫 膜法是值得推广应用的最经济便捷的基于 Odyssey红外荧光成像系统的近红外荧光EMSA实验方法。 [关键词 】 近红外荧光电泳迁移率变动分析 ；Odyssey红外荧光成像系统；间接扫膜法 [中图分类号] Q503 [文献标识码] A 【文章编号] 1009-0002(2011)01—0071—06 ExperimentalM ethodsofNear-Infrared FluorescenceElectrophoresis M obility ShiftAssay GA0ring,LIU Yi WANG Jin—Ke State Key Laboratory ofBioelectronics，ExperimentalCenterofBioteehnology and Biomaterials，SchoolofBiological SciencesandMedicalEngineering，SoutheastUniversity，Nanjing210096，China [Abstract]Objective：Theelectrophoresismobilityshiftassay(EMSA)isgoldenstandardtechniqueforstudyingthe interacti0n ofDNA and protein． The meritsand limi~tionsofthelatestnear—infrared fluorescence—labeled EMSA (NIRF—EMSA)werebrieflyanalyzed．Onthisbase，experimentsweredesignedtoimprovetheNIRF-EMSA protocol forroutineapplication．Methods：We tried three NIRF-EMSA protocols，including scanning gel，staining geland scanningmembrane， and systematically evaluated the complexity ofexperimentalprocedures， meritsand disadvan— rages，and the assay cost．Atthe same time，three NIRF—EMSA approacheswerecompared with chemiluminescent EMSA．Results：Three protocolsallallowed ofrbetterdetection results．However，in comparison，scanning mem · branewasthe mostcost—effective approach．Conclusion：Scanningmembrane isthe mostfacileand cost—effective NIRF-EMSA method wo~hyto be applied to routine experimentin thefuture． [Keywords] near—infraredfluor