大鼠肠内菌对麦冬皂苷D代谢的研究.pdfVIP

大鼠肠内菌对麦冬皂苷D 代谢的研究 沈 岚 上海中医药大学药剂教研室 上海 201203 摘要 目的 通过大鼠肠内菌对麦冬皂苷D 的离体 在体代谢转化实验 探索麦冬皂苷D 口服后 吸收的入血成分 方法 用HPLC-ELSD定量检测离体实验的代谢产物及原形药的含量 TLCHPLC-MS 法分别鉴定 监测在体实验大鼠尿 血中的代谢产物 结果 麦冬皂苷D 可被大鼠肠内菌群代谢 且随着时间的延长 代谢产物之一薯蓣皂苷元增加 且尿中无原形药麦冬皂苷D 存在 结论 薯蓣 皂苷元为麦冬皂苷D 经肠内菌代谢后的吸收入血成分之一 关键词 麦冬皂苷D 肠内菌代谢 薯蓣皂苷元 入血成分 麦冬是中医常用药 具有滋阴润肺 益胃生津 清心除烦的功效 1 现代药理研究表明 2 3 麦 冬治疗冠心病的主要有效成分是甾体皂苷 口服是中药最为常用的给药途径 活性入血组分即为中药 最终起效的物质基础 因此 探明中药组分的体内有效物质基础 将对阐明中药起效关键问题及最终 剂型的选择起决定性的作用 本文通过大鼠肠内菌对麦冬皂苷D 离体 在体代谢转化实验 采用HPLC-ELSD定量检测离体实 验的代谢产物及原形药的含量 TLCHPLC-MS法分别鉴定 监测在体实验大鼠尿 血中的代谢产物 探索麦冬皂苷D 口服后吸收的入血成分 以期阐明传统中药制剂中麦冬皂苷发挥药效的机制 并促 进新药制剂的开发 1.实验材料 1.1动物 Wistar大鼠 雄性 体重220250g本校实验动物中心提供 1.2标准对照品 麦冬皂苷 D 标准品 自制 经测定纯度达 99%以上 薯蓣皂苷元标准品 Sigma 公司 1.3药品 麦冬皂苷D 粗品 自制 经测定纯度达73%以上 胃蛋白酶 购于华美试剂公司 25g/ 瓶 1.4试剂 甲醇 HPLC乙醚 AR 乙腈 进口 HPLC双蒸水 生理盐水 医用 人工胃液 10g胃蛋白酶溶于100ml稀盐酸 pH=1.2中 糖盐水 25.0g葡萄糖于500ml容量瓶 生理盐水定容至刻度 摇匀 厌氧培养液 取37.5 ml溶液A 0.78%HPOK37.5ml溶液B 0.47% KHPO1.18%NaCl1.2%NH 2 4 2 4 4 SO0.12% CaCl0.25% MgSOHO 0.1%resazurine 1ml,L-cysteineHO 0.5g,25%L- 2 4 2 4 2 2 2ml,8%NaCO 50ml牛肉膏1g蛋白胨1g和营养琼脂1g加蒸馏水至1l最后调pH7.5-8.0 2 3 1.5仪器 Agilent 1100型HPLC美国安捷伦公司 蒸发光散射检测器PL-ELSD1000Pilymer LaboratoriesAgilent 1100型ESI-MS检测器 美国安捷伦公司 超级恒温器 TG-332A型微量 天平 上海精密科学仪器有限公司 2.分析方法的建立 2.1麦冬皂苷D HPLC-ELSD分析方法 色谱条件: 色谱柱 Alltech Platinum C 100A 5 250mm4.6mm 18 流动相 乙腈-水(42:58)流 速 1.00ml/min 检测器 ELSD 雾化温度 60 蒸发温度 80 气流速度 1.5ml/min 标准曲线的建立 精密称取麦冬皂苷D 标准品5.90mg用甲醇配制成1.18mg/ml麦冬皂苷D 标准 品溶液 将其稀释成一系列浓度标准品溶液 按以上色谱条件进行HPLC分析 以峰面积A的自然对 数为横轴 以含量Y的自然对数为纵轴 得标准曲线回归方程lnY=0.1566+0.5732lnAr=0.9991线 性范围为5.923.6g 最低检测限为5.9g 2.2薯蓣皂苷元HPLC-ELSD分析方法的建立 色谱条件 色谱柱Alltech Platinum C 100A 5 250mm4.6mm 18