腺病毒介导hIL24对肝癌荷瘤裸鼠的体内实验研讨.pdfVIP

童耐t一 ●15it●●千蠢●‘■t●●●车套奠 2006,$．17-20 腺病毒介导hlL-24对肝癌荷瘤裸鼠的体内实验研究 汪小华‘叶震敏2盛伟华2谢宇锋2王金志2扬吉成2‘ 【摘要l目的研究hlL-24腺病毒表达栽体抑制SMMD772l肝癌细胞荷瘤裸鼠肿瘤的生长 及其作用机制．方法将本室构建的Ad．hⅡ-24转染QBI-293A细胞．多轮感染后获得高效价的病 纽)进行抗肿瘤试验．四纽均使用瘤体内注射干预用药，10(hJl，．R：NS组．Ad组(107p柚和Ad-h11．r24 两周分别测皮下瘸体的长径(L)、短径(w)’计算出瘤体体积，治疗开始后的第15天，将裸鼠脱颈 处死，安尔碘消毒肿瘤局部后切开皮肤，摘取瘤体称重，计算出抑瘤率，显微镜观察细胞生长形态． 蛋白表达细胞数较其它3组呈显著性升高(P0．01)，P27核内抑癌基因表达细胞数也较Ns纽明显增 明显变化．结论Ad．hIL七4可以显著抑制裸鼠SMMC-7721荷瘤的生长，其机制可能通过激活 caspase途径．上调P27抑癌基因表达．但不依赖P53基因谤导细胞凋亡和抑制血管形成等多途径 发挥抑瘤作用． 【关键蠲lAd-hIL-24；SMMC．772l荷瘤；抑瘤；机刳 族的新成员，也是一种分泌蛋白，它有细胞因子的特性，如过度表达。则表现为肿瘤生长抑制的作 用．如由腺病毒载体介导(Ad-hIL-24)，它能通过多途径发挥抑瘤作用，如抑制肿瘤细胞生长和血管 3而诱导凋亡等。能杀伤多种培养的 形成、特异增加p53表达、增加促凋亡蛋白BAX和casp觞e 肿瘤细胞如肺癌、乳腺癌、鼻咽癌及前列腺癌细胞四，而且对正常细胞无不利作用翎。’但应月r Ad-ML-24对肝癌细胞的抑瘤作用研究国外研究不多，国内也未见报道，本研究旨在探索Ad-hIL-24 的体内抑制肝癌生长作用．并探讨其部分作用机制。 材料和方法 1．实验材料 江苏省南通精华制药有限公司。Ⅵ’GF抗体、P53抗体、P27抗体、Caspese3抗体检测试剂盒购自 上海晶美公司．CD34检测试剂盒购自深圳晶美生物公司。免疫组化由苏州大学医学院病理教研室 高年制老师协助完成． 2实验方法 2．1 日在荧光显微镜下观察荧光．4．6d收集细胞悬液，2000r／min离心5min，细胞沉淀用无菌NS洗涤 2．3次后。将细胞悬液反复冻溶3次，2000f／rain离心5min，取上清，可获得高滴度重组病毒子 ．基空嘎日：苏州大学医学发晨基金量助(EEl34517k’通讯作者：扬吉成(1942．)，苏州大学医学盹细胞与分干生 物学教研室；E-mail：—icvanu国．su—da．edu．cn；研究方向：舟子免疫学；安擞巢湖人 88 音．I童一 摹15叠4bt干嚣-it曩-tlid子蠢奉套冀 2006．8．17-20 (Ad-hIL-24)于40C保存．同法制备Ad病毒子空载体。 2．2病毒效价的测定：将生长良好的QBI-293A细胞经胰酶消化后计数，稀释细胞浓度为10，个，m1． 释，每个稀释度按每孔100ul接种。培养18h后，荧光显微镜下。对荧光计数，按公式：病毒效价 呵荧光数×io)／相应稀释度。 2．3 2％胰酶消化。并用无血清培养液稀释后以1500转／分的速度离心5分钟，细胞计数后配成 后2周分别测皮下瘤的长径(L)、短径(w)，按公式计算瘤体体积(v=LxW2／2)，治疗开始后的第15 天，将裸鼠脱颈处死，安尔碘清毒肿瘤局部皮肤后，切开皮肤．摘取瘤体称重，计算出抑瘤率。抑 100％。瘤体组织经10％福尔马林固定 瘤率惭Hl一实验组平均瘤重(体积埘照组平均瘤重(体积)】x 过夜，常规石蜡包埋待用，做组织HE染色及组织免疫组化指标测定。 2．4治疗后肿瘤HE染色结果判断：HE染色程序按常规进行阿。判断标准：肿瘤细胞如呈现体积 变小、细胞质浓缩、细胞核变小，染色质浓缩并凝结成块．出现染色质沿核膜内侧撵列的核边聚． bodies)，则判断为肿瘤细胞凋亡。 甚至表现为细胞核裂解形成