腺病毒介导的PTEN对A549肺癌细胞体内外生长的影响研究.pdfVIP

童．Il音一 ●15t●●干蠢●^■t●矗●术4HZ 20蛞JLl7-20 腺病毒介导的IYFEN对A549肺癌细胞体内外生长的影响 张海峰章春花盛纬率王金恚谢宇锋缪竞诚扬吉威’ 【摘要I；目的t研究携带PTEN基因的腺病毒表达载体对A549肺癌细胞体内外生长的抑制效应． 为进一步开展肿瘤临床基因治疗奠定基础。方法t从人外周血淋巴细胞中通过R鼻PcR技术，扩增 体外实验用MTr法检测Ad-PTEN对A549肺癌细胞的生长抑制作用．体内实验通过建立荷瘤裸鼠 模型，检测Ad-PTEN对A549肺癌细胞移植瘤体内生长的影响。结果，携带PTEN基因的腺病毒 表达载体Ad．PTEN对A549肺癌细胞体内及体外生长抑制率分别迭57e和59％．结论；我们成功 构建了Ad-PTEN腺病毒载体．抗肿瘤实验结果表明能在体内外抑制A549肺癌细胞及其移植癌的 生长。 I关键词1：PTEN；腺病毒载体；抗肿瘤 andtensin 与细胞骨架张力蛋白同源在肿瘤第lO号染色体有缺失的磷酸脂酶(Phosphatase chromosometen homologuedeleted 的一种新的抑癌基因(简称P1EN)。现已证实该基因的突变、失活与多种肿瘤的发生发展密切相关． 成为继P53后又一有重要意义的抑癌基因。为了探讨PTEN基因的生物学活性及其在肿瘤防治中的 作用．我们从人外周血淋巴细胞中通过RT-PCR技术，扩增出PTEN基因片段，将其克隆到 pAdTrack-CMV转移载体，进而构建了PTEN重组腺病毒载体，并在体内外研究了肿瘤生长的抑制 作用，为今后开展肿瘤临床基因治疗研究奠定了基础． 1材料与方法 1．1材料 England 教授惠赠．Lipofectamine 自迈新公司．4到6同龄雄性裸鼠购自上海斯莱克实验动物有限责任公司。引物由上海生物工程公 司合成。 1．2方法 1．2．1 R鼻PCR扩增PⅡ【N l工．1．1总RNA的提取分离健康人外周血单个核细胞渗照RNA抽提试剂盒手册进行总RNA的 提取。 1．2．12 min：然后加 eDNA的合成取3IIl总RNA，15mmol／LOligo-dT-l加入2m．65(2作用5 dNTPs RNA酶抑制剂。 入5xRT缓冲液4IIl，10mmol／L 1mM-MLV逆转录酶，最后加 2m和0．5p1 h，70C10min． 双蒸水至总体积为20山．置37℃水浴l 点，下游引物中加入H面衄酶切位点，序列如下： 上游引物l ccatealea cag aagag 5，--3gcg．．幽tga a 下游引物：5--3c gc ag．婴__tttcagact做g协毗tgc 1．2．1A PcR扩增 。基奎礓胃：笨州大擘医学发展基空责助项目(No．EEl34517) 作者简介l张海峰(1974年一)，男，现工作单位为蚌埠医学院附属医院肾内科#嗵讯作者tTel；(05t2)65SS0107 臣删I：地理班垣盗蜮匦鲴呦 135 t．叶t一 摹15t●●干托●^-t●5●车●截 2006．IT-2Q 10xReaction dNTP PcR反应体系如下；dd 0．5肛l·Pl