日葵花瓣提取物改善H2O2对成骨细胞损伤的影响研究.pdfVIP

中国科协第四届优秀傅士生学术年会论文集 日葵花瓣提取物改善H202对成骨细胞损伤的影响 裴凌鹏 中国中医科学院，北京，100700 摘要利用C02超临界技术从向日葵花瓣中制备高纯度叶黄素酯，经体外诱导生成单体后， 以及膜流动相关参数的测定，发现无论叶黄素酯或单体均能在体外有效地淬灭羟自由基，进 而减少H202对成骨细胞产生的氧化损伤，有利于细胞的增殖，促进骨的形成过程，其中单 体效果较酯更好。这表明体外叶黄素(酯或单体)在预防自由基氧化，维持成骨细胞活性， 促进骨形成方面具有一定的作用，推测可能对老年性骨质疏松具有一定预防潜力． 关键词骨营养学；叶黄素；成骨细胞；抗氧化损伤 分子量为568，88。由于分子结构中多个烯键的存在，叶黄素分子可以发生几何异构，其全反式异构体的分 子结构见图l。叶黄素为有机化合物，能溶于大多数有机试剂。由于叶黄素含羟基，具有较强的极性，因 此，在极性有机试剂中的饱和溶解度较高。叶黄素可在人体内发挥多种重要的防治疾病功能。例如：它能 清除自由基、阻止脂质的过氧化，延缓老年期动脉粥样硬化的形成、预防老年性黄斑衰退、减低蓝光对视 网膜的损伤、影响骨质代谢等【11。因此，叶黄素在功能食品和药品中的应用具有良好前景。 图1 叶黄素全反式异构体的分子结构 向日葵花中的主要类胡萝卜素化合物为叶黄素酯。由于叶黄素酯的极性比叶黄素的低很多，故用非极性有 机试剂法可以达到很好的萃取效果。常用的萃取剂有正己烷和醚类。萃取的叶黄素酯通过水解形成叶黄素 单体。因此，向日葵花被认为是继万寿菊后制备叶黄素的又一理想资源。 目前，越来越多的实验室开展了对叶黄素防治疾病功能以及在食品中应用的研究。由于高纯度叶黄素 制品的市场价格昂贵，许多实验室在开展这些方面的研究工作时多自行制备叶黄素组分。因此，一种产率 和产物质量稳定而操作又可行的实验室规模制备叶黄素的方法是很有价值的。本文旨在介绍了一种在我们 实验室中应用了多年的叶黄素制备方法，然后用得到的叶黄素酯和单体分别处理H202氧化损伤鼠成骨细 胞模型。对细胞的ROS、LPO含量、SOD酶活性以及细胞膜流动性进行测定，进而研究此类化合物对增 强成骨细胞对抗H202氧化能力的影响。 1 材料与方法 1．1主要仪器和试剂 25R 生物技术 Carotenoid 600E J2一SH高速冰冻离心机，KA．1000型台式离心机，C30柱(YMc 养箱(Precision 1．2向日葵干花瓣叶黄素酯提取 集在压力控制阀后的收集管中、定容。每次萃取重复3次，分别测定每个萃取物中的叶黄素酯含量，计算 平均值。每次萃取过程完成以后，用10mL左右的丙酮冲洗整个流路，包括萃取池和压力调节阀。 1．2．2酯体皂化：将部分提取液至于三角瓶中，加入等量10％氢氧化钾一乙醇溶液，搅拌过夜(12h)。 进行酯的皂化。皂化完成后，用乙醚和2％氯化钠水溶液在分液漏斗中将皂化产物萃取到乙醚相中，得到 叶黄素单体提取液。 1．2．3叶黄素单体柱色谱纯化 (1)装柱：将活化好的氧化铝装填予玻璃层析柱中，装填高度为12cm，用正己烷润湿。 脱液。将洗脱液用氮气吹干制粉，装入充满氮气的玻璃瓶内，．70℃储存备用。 1．3叶黄素单体鉴定 1．3．1’根据其HPLC中保留时间和紫外可见吸收光谱的特征峰与标准品对照进行鉴定。得到的向日葵干花 YMCCarotenoid x 提取液经过微膜过滤后用HPLC分离。色谱条件：色谱柱：Waters S-5(4．6ram250mm)； B 防止叶黄素降解；线性梯度洗脱：B在10min内由0％增加至80％；10—20minB维持80％：20—30min 1．3．2叶黄素单体质谱分析：收集色谱图上叶黄素单体进行