时间分辨荧光免疫分析技术在真菌毒素检测的应用研究.pdfVIP

王 坤等 时间分辨荧光免疫分析技术在真菌毒素检测的应用 第 2期 doi：10．3969／j．issn．1000-484X．2013．02．018 时间分辨荧光免疫分析技术在真菌毒素检测的应用① 王 坤 侯玉泽 胡骁飞② 王 耀 李文君 裴亚峰 邓瑞广② (河南科技大学食品-9生物工程学院，洛阳471003) 中国图书分类号 R446．61 文献标识码 A 文章编号 1000-484X(2013)02-0197-05 近些年，生物标记技术不断的发展 。免疫分析技 排除了 术得到了快速 的发展。例如放射免疫分析技术 ，由 镧系元素与通常的荧光物质相 比较，镧系元素 于放射分析技术存在污染性和局限性，限制其进一 离子螯合物荧光的衰变时间要长的多。为传统荧光 步发展与应用，继由放射免疫分析技术之后，又研究 的10。～10倍。在用时间分辨荧光仪测量荧光时， 形成了各种非放射免疫技术，包括酶标记分析技术、 可以适当的延迟一段时间，待其它物质的荧光衰变 荧光免疫分析技术、化学发光免疫分析技术、时间分 后再测量，这时只测量 Eu 标记物的特异性荧光， 辨荧光 免疫分析 (Time．resolvednuoreimmuoassay， 即通过 TRFIA技术，极大地降低 了本底荧光，这是 TRFIA)技术等。但是，从灵敏度上来说只有TRFIA TRFIA高灵敏度和低干扰的原因之一l6]。 技术可与放射免疫分析媲美。TRFIA是20世纪80 镧系螯合物激发光光谱比较宽，通常在 300～ 年代迅速发展起来的一种被公认为最有发展前途的 500nm，可通过增加激发光能量来提高灵敏度 。而 一 种非放射标记分析技术 ¨]。 它的发射光谱带很窄，甚至不到 10nm，可采用只允 许发射荧光通过的滤光片，进一步降低本底荧光，这 1 TRFIA 的技术原理和优势 样可以大大的提高检测的灵敏度。 1．1 TRFIA的技术原理 TRFIA是用具有特殊荧 镧系离子与双功能螯合剂螯合后，可形成稳定 光的镧系离子与螯合剂结合作为示踪物标记蛋 白 的螯合物 。稳定性非常高，生产 出的产品保质期可以 质、多肽、激素、抗体等，在一定的反应体系(如：抗 长达2年。而酶标记物常因其纯度、显色底物不稳 原抗体免疫反应、生物素亲和素反应、核酸探针杂交 定等问题，使其应用受到限制。再者，Eu¨标记物 反应 、靶细胞与效应细胞的杀伤反应等)发生反应 体积很小(为原子标记)，标记后不会影响被标记物 后 ．用时间分辨荧光仪测定产物 中的特异荧光强度 ， 的空间立体结构，这既保证 了被检测物质的稳定性 推测反应体系中分析物的浓度 ，从而达到对待测物 (尤其对蛋 白质影响更小)，又可实现多位点标记， 质进行定量分析的 目的 J。 这样可以实现一个试剂盒能够同时检测出两种或两 1．2 TRFIA的优势 TRFIA技术具有酶标记分析 种 以上的物质 ．这样不但简便还大大降低了成本 。 技术和同位素标记技术的优点：具有灵敏度高、特异 2 时间分辨荧光免疫分析技术 (TRFIA)在 性强、稳定性好，且测定范围宽，试剂寿命长，操作简 真菌毒素检测方面的应用 便和非放射性等特点_4]。优势有 以下几点： 一 般荧光物质光谱 的Stokes位移非常的小，只 真菌毒素 (Myeotoxins)是 由产毒真菌 (主要为 有几十纳米l5]，导致激发光谱和发射光谱通常有部 曲霉属、青霉属及镰孢属)在适宜的环境条件下产 分重叠，互相干扰严重。但是镧系离子与螯合剂形 生的具有很强毒性的二级代谢产物，它主要对食品、