spp.）（同翅目盾蚧科）及其在检疫上之应用.PDFVIP

研究報告 台灣昆蟲 21: 365-375 (2001) Formosan Entomol. 21: 365-375 (2001) 利用 PCR-RFLP 技術鑑定三種白輪盾介殼蟲 ( Aulacaspis spp.) (同翅目：盾蚧科) 及其在檢疫上之應用 邱一中 吳文哲 石正人* 國立台灣大學昆蟲學系 台北市大安區羅斯福路四段一號 摘 要 介殼蟲蟲體微小且外形相似，幼體時期特徵不明顯，在鑑定上不易確定，造成在 檢疫工作上困難重重。本研究主要利用基因組核酸標誌 (genomic DNA markers) 建 立分子診斷技術，以鑑別三種白輪盾蚧屬 (Aulacaspis spp.) 之介殼蟲，分別為蘇鐵 白輪盾蚧 (A. yasumatsui Takagi) 、月橘白輪盾蚧 (A. murrayae Takahashi) 和樟 白輪盾蚧 (A. yabunikkei Kuwana) 。利用聚合 連鎖反應－限制 片段長度多態型 (polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism, PCR-RFLP) 技術，探討核糖體形成基因 (ribosomal DNA, rDNA) ，作為鑑別三種 介殼蟲的可行性。我們使用單隻標本分別萃取 DNA 後，利用 PCR 引子對 (Amur18S-3 和 ITS6) 增幅 rDNA 之 部分的 18S 、ITS1 及部分的 5.8S 區域， 蘇鐵白輪盾蚧和月橘白輪盾蚧均產生約 500 bp 的 DNA 片段；樟白輪盾蚧則產生 約 450 bp 的 DNA 片段。利用多種核酸內切 進行 DNA 片段切割，結果以 TaqI 、MspI 、CfoI 和 HaeIII 核酸內切 ，所得圖譜的種類特異性較高，可容易地 區別三種白輪盾蚧。 關鍵詞： 白輪盾蚧、快速鑑定、聚合 連鎖反應 (PCR) 、限制性片段長度多態型 (RELP) 、轉錄區內空白段 1(ITS1) 。 前 言 Ulenberg, 1990; Wu, 1994) 。根據最新調查 資料顯示，目前在蘇鐵上嚴重危害的白輪盾 白輪盾蚧屬 (Aulacaspis spp.) 昆蟲，由 蚧，疑似為新侵入台灣的種類，將來若擴散或 於身體細小，繁殖力強，且常隨苗木、種子、 轉移至其它寄主植物，將可能對農作物造成更 果實、塊莖和塊根等，侵入新地區而造成嚴重 嚴重損害。 的蟲害問題，是農業上重要的經濟害蟲，且被 白輪盾蚧屬的介殼蟲外形極為近似，即使 列為國際重要的檢疫害蟲 (Burger and 是熟練的分類學者鑑定這些種類也很困難。目 *論文聯繫人 e-mail:shihcj@.tw 利用 PCR-RFLP 技術鑑定三種白輪盾介殼蟲及其在檢疫上之應用 365 前，主要以雌成蟲的形態特徵為鑑定的依據， 定期至台灣各地依寄主植物、地理分布及 至於若蟲和雄成蟲則限於形態不穩定或特徵 季節變化等，記錄並採集三種白輪盾蚧作為試 不明顯，鑑定極為不易，在檢疫上面臨極大的 驗材料。部分介殼蟲作成玻片標本，依據外部 難題 (Wu, 1986, 1994) 。為了解決鑑定的瓶