STAT3荧光素酶报告基因检测系统的构建及其检测STAT3活化能力的研究.docVIP

STAT3荧光素酶报告基因检测系统的构建及其检测STAT3活化能力的研究 王博 张英 王林玉 江山娇 蔡永松 周艳 李琰清 侯卫坤 西安交通大学第一附属医院转化医学中心 陕西省肿瘤精准医学重点实验室 西安交通大学第一附属医院消化内科 西安交通大学第一附属医院骨科 西安交通大学第一附属医院皮肤科 西安交通大学第一附属医院检验科 西安交通大学医学部附属红会医院关节病医院骨坏死与关节重建病区 X 关注成功！ 加关注后您将方便地在 我的关注中得到本文献的被引频次变化的通知！ 新浪微博 腾讯微博 人人网 开心网 豆瓣网 网易微博 摘????要： 目的 构建STAT3荧光素酶报告基因检测系统并检测STAT3活化能力, 为筛选STAT3活性调控相关药物提供实验基础。方法 基因合成STAT3反应元件序列, 退火形成含酶切位点的双链DNA, 内切酶XhoⅠ和HindⅢ双酶切报告基因载体p GL6-TA, T4 DNA连接酶将STAT3反应元件插入p GL6-TA载体多克隆位点, 将该载体转染He La细胞, G418筛选STAT3荧光素酶报告基因稳定表达的单克隆He La细胞株。5, 10, 20 ng/ml不同浓度激动剂IL-6和20, 40, 80μmol/L抑制剂S3I-201刺激单克隆He La-STAT3-Luc细胞, 检测荧光素酶对应的发光值验证STAT3荧光素酶报告基因检测系统的检测能力。结果测序和比对结果显示, STAT3荧光素酶报告基因系统p GL6-STAT3-Luc中STAT3反应元件序列正确;G418成功筛选出稳定表达STAT3荧光素酶报告基因的单克隆He La细胞株;5, 10和20 ng/ml浓度IL-6可刺激He La-STAT3-Luc细胞中荧光素酶的活性显著升高 (P0.001) , 且分别升高5.4, 10.3和20.0倍;不同时间点检测1 ng/ml和5 ng/ml浓度IL-6刺激He La-STAT3-Luc细胞, 其荧光素酶的活性呈现线性增长趋势;40μmol/L和80μmol/L浓度的抑制剂S3I-201与10 ng/ml浓度IL-6共刺激He La-STAT3-Luc细胞, 其荧光素酶的活性显著降低 (P0.001) , STAT3活化的抑制率分别为18.9%和43.7%。结论 成功构建STAT3荧光素酶报告基因检测系统, 该系统具有有效检测STAT3活化水平的能力。 关键词： 荧光素酶; 报告基因; JNK-STAT信号通路; STAT3; 作者简介：王博, 男, 1987-12生, 硕士, 实习研究员, E-mail:realwbo@163.com 作者简介：侯卫坤, E-mail:houweikun@ 收稿日期：2017-08-11 基金：国家自然科学基金资助项目 81703130) Establishment of STAT3 luciferase reporter gene assay system WANG Bo ZHANG Ying WANG Linyu JIANG Shanjiao CAI Yongsong ZHOU Yan LI Yanqing HOU Weikun Center for Translational Medicine, First Affiliated Hospital of Xian Jiaotong University; Department of Gastroenterology, First Affiliated Hospital of Xian Jiaotong University; Department of Orthopaedics, First Affiliated Hospital of Xian Jiaotong University; Department of Dermatology, First Affiliated Hospital of Xian Jiaotong University; Department of Laboratory Medicine, First Affiliated Hospital of Xian Jiaotong University; Osteonecrosis and Joint Reconstruction Ward, Joint Surgery, Xian Honghui Hospital, Health Science Center, Xian Jiaotong University; Abstract： Objective To construct STAT3 luciferase reporter gene assay system, a