siRNA干涉禽流感病毒在鸡胚成纤维细胞中基因表达的影响研究.pdfVIP

空垦查墼量匿堂金查癜堂坌垒筮±婴达堂查堑过金垒塞塞 siRNA干涉禽流感病毒在鸡胚成纤维细胞中基因表达的影响。 马莉，岳华#，李定霏 (西南民族大学生命科学与技术学院四川成都610041) influenza [摘要]根据GeneBank中禽流感病毒(Avian interference 小干扰RNA(Small RNA，si]RNA)——siRNA—NP、siRNA—PA和siRNA—PBll将siRNA和转染试剂Silent 和阴性对照中AIV 凝价。结果表明。干涉组siRNA--PA能有效、特异地敲低AIVPA基因的表达，使PA基因的mRNA水平下降最高可达99． 7 结果表明，干涉组不影响细胞的病变和病毒的增殖。本试验成功地在鸡胚成纤维细胞中评价了siRNA对AIV基因表达的影 响，这将使RNAi技术用于禽流感的防治成为可能和为探讨禽病病毒基因组的功能提供参考。 [关键词]RNAi，鸡胚成纤维细胞，禽流感病毒I基因表达 禽流感(Avianinfluenza，AI)是由正黏病毒科 基因的保守区序列设计并合成3个siRNA分子一 流感病毒属的A型流感病毒引起的危及禽类、人类 I利用 和小型哺乳动物的一种从呼吸系统到全身的严重性 败血症等多种症状的烈性传染病[1]。该病严重威胁 embryo 世界各地的养禽业，常常造成巨大的经济损失，尤其 们对靶基因表达的影响，结果报告如下。 是H5、H7亚型引起的高致病性AI不仅给养禽业 带来灾难，同时也引起了社会公共卫生问题。 1材料 然而防制AI尚无有效的治疗药物，目前我们 国家防制本病的主要方法是切断传播途径，采取捕 (H5N1)：由青岛易邦生物工程有限公司开放实验 influenzavirus， 杀措施和接种禽流感病毒(Avian 室提供，血凝价为27。 AIV)疫苗，使动物获得坚强的免疫力以抵抗AIV1．2鸡胚SPF鸡胚由南京药械厂购买SPF受精卵 的侵袭。但是由于AIV亚型众多，不同亚型之间彼 自行孵化。 此不能交叉保护，且变异性极强，这给AI防制带来 SiLent—FectTM 极大的困难。因此迫切需要一种新的方法进行AI Lipid 防治。 PremixEx RNA干扰(RNAinterference，RNAi)是由双WaqTM、RNAisoReagent、TaqDNA聚 链RNA(Double PCR sequenceRNA，dsRNA)所引发的合酶、RNA 使细胞内同源mRNA降解而产生转录后基因沉默司，日本)。 的现象o’3]，随着对RNAi机理的深入研究，该技术1．4主要仪器iCycleriQTM荧光定量PCR仪(Bio— 已被广泛用于病毒性疾病的防治研究中，如禽流感 Rad公司，美国)；荧光明场两用倒置显微镜IX71 病毒‘副、人流感病毒‘u、免疫缺陷病毒‘¨、肝炎病 毒[副、口蹄疫病毒[6]等。 司，美国)；Centrifuge5804R台式高速冷冻离心机 本试验根据GeneBank中AIVNP、PA和PBl(Eppendorf公司，德国)。 ·作者简介：马莉(1982一)-女，宁夏，硕士，研究方向；禽病分子生物学，电话 E—maii：maryl9820225@tom．corn 通讯作者：岳华#(1963～)，女，博士，教授，研究方向：禽病分子生物学，电话{028- 01．cn E--mail：yhua900@yahoo．C 一318—