siRNA抑制猪瘟病毒增殖效果研讨.pdfVIP

第六次全国会员代表大会暨第11次学术研讨会 存在细胞间差异。 本研究中经同源重组后获得的重组病毒SA215(A)内HCVE2基因位于PRVgE基因启动子、SV40 启动子和HCMV启动子控制之下，理论上应获得良好表达。通过直接荧光抗体染色，在感染重组病毒SA215 (A)株的Vero细胞浆内检测到特异性荧光，并在无细胞处或细胞间也检测到少量荧光。分析原因可能为 本次插入的HCVE2基因包含有完整的信号肽编码区，试验已证实在HCV病毒中信号肽作用下会导致E2 基因部分表达产物以分泌形式释放。在猪瘟病毒内E2基因的表达产物可能以几种形式存在，其非糖基化 产物大小约为4lku，糖基化产物大小则在50．53ku之间，少部分产物会形成分子量约110ku的同源二聚体 ¨引。SDS．PAGE电泳分析，SA215(A)与PRVFa两个毒株的蛋白质电泳图谱呈现明显差异。重组病毒至 少缺少2个条带，同时在大小约5lku位置处却明显多了1个条带。电泳转移蛋白质于硝酸纤维膜后进行 免疫学测定，结果在¨b位置出现阳性条带，表明HCVE2基因在PRV中获得表达和加工，其大小与来自 白与猪瘟病毒自身表达E2蛋白生物学功能应该相当。 ’ 现有相关研究中通常以10周龄仔猪为试验对象，根据伪狂犬病发病特点即使该年龄猪只在未进行任 何疫苗接种情况受到强毒攻击也不会表现明显临床症状，仅形成潜伏感梨13J。参照《中华人民共和国兽用 生物制品质量标准》(2001年版)【8l对伪狂犬病活疫苗和猪瘟活疫苗有关规定，我们在试验中对试验动物 和第42d分别进行PRV(PRV 攻毒保护试验，并以临床症状、体温、增重为主要观察指标。结果表明重组病毒SA215(A)具有良好免 疫原性，对于伪狂犬病应与猪伪狂犬病基因缺失活疫苗SA215相当；针对猪瘟则应介于猪瘟牛睾丸细胞苗 和猪瘟兔化弱毒疫苗之间。据此结果，认为本研究构建的猪瘟伪狂犬病重组病毒SA215(A)株具有 良好免疫原性，是一株可以同时用于预防猪瘟和伪狂犬病的疫苗候选株。 参考文献略 siRNA抑制猪瘟病毒增殖效果研究 徐兴然 肖昌 查云峰史子学夏成柱涂长春1 (1．解放军军事医学科学院军事兽医研究所；2．吉林大学农学部畜牧兽医学院，长春，130062) 的细胞中，病毒感染后72 h只能检测到很少的细胞被荧光抗体染色，而对照细胞能被全部染色。用Real．time 了病毒基因组在感染细胞中的复制。转染细胞感染猪瘟病毒后60h病毒感染滴度检测结果显示：转染siNl、 子的增长。间接免疫荧光、Real．time 且其维持时间为72．84h，72．84 h后病毒增殖增加。 333 猪传染病 关键词：siRNA猪瘟病毒：增殖：抑制 swinefevervirus，CSFV)引起的一种猪的高度接触性传染病，是严重 猪瘟是由猪瘟病毒(Classical 危害全球养猪业的最主要动物疾病之一，也是养猪国家的动物疫病防制的重点。我国是世界第一大养猪国， 研究猪瘟的防制具有重要的理论和现实意义。 RNA干扰(RNA silencing 降解，从而达到阻抑基因表达的目的【卜31。RNAi从一发现开始就受到病毒学研究者的高度重视，被认为是 21．23 RNA聚合酶体外转录系统，合 的增殖。本实验通过设计针对猪瘟病毒不同基因的特异siRNA序列，利用T7 能有效地抑制了猪瘟病毒基因的表达，进而抑制猪瘟病毒基因组的复制并影响病毒的装配成熟过程，实验 结果为研制抗CSFV新型药物提供一定的参考依据。 1材料与方法 1．1细胞与毒株 PK-15猪肾细胞系’80代：猪瘟病毒Shimen株，购自中国兽药监察所。 1．2 siRNA的制备 的siRNA分子si581。同时，将各个序列的反向序列进行相同的分析，确证它们与猪瘟病毒和宿主细胞序列 系统的寡核苷酸设计方法，分别合成与它们对应的转录正义链和反义链RNA的DNA序列。将合成的