荧光成像在生物分析中的应用-eduwest.pdfVIP

第 34 卷 分析化学 ( FENX I HUAXU E) 　评述与进展 第 7期 　　　　　　　　　　　 　　　　　　　　　　　 2006年 7 月 Ch ine se Journal of Analytical Chem istry 1030 ～1034 评述与进展 荧光成像在生物分析中的应用 张 宁　陈蓁蓁 　唐 波 (山东师范大学化学化工与材料科学学院 ,济南 250014) 摘 　要 　荧光显微镜与荧光光谱仪耦合系统可获取显微荧光成像及微区荧光光谱 、荧光寿命的测定信息 ,广 泛应用于细胞 、组织中蛋白质的结构功能分析 ,核酸的识别检测 ,金属离子 、自由基的定量测定 , 以及纳米生物 探针的研制等生物分析研究的热点领域 。本文引用文献 46篇 ,综述了荧光成像在生物分析中的应用新进展 。 关键词 　荧光显微镜与荧光光谱仪耦合 ,荧光成像 ,生物分析 ,综述 1　引　　言 荧光显微镜在生物学和医学领域已得到了广泛应用 ,是观测细胞形态 、结构和生命现象的有力工 具 [ 1～6 ] 。荧光显微镜作为一种必不可少的分析手段 ,常用于定性观察细胞内部荧光物质的空间分布和 强度分布 ,得到细胞的荧光图像 ,研究细胞的结构 。然而荧光显微镜不能定量给出图像发光的强度数 值 ,无法研究细胞图像发光强度变化不大或荧光物质空间分布变化细微的生理过程 。因此 ,随着生物医 学的飞速发展 ,迫切需要有更高灵敏度 ,操作更快捷 ,功能更加完备的仪器来满足生物学和医学研究发 展的要求 。荧光显微镜与荧光光谱仪耦合而成的系统仪器能够获取显微荧光成像及微区荧光强度 、荧 光寿命的测定信息 。选择荧光探针对被标记物进行特异性标记 ,荧光探针的亮度即荧光强度可反映被 标记物相对含量的多少 。荧光显微镜对图像采集后 ,荧光光谱仪可测量图像的荧光强度 ,对获取的图像 进行荧光强度的定量 ,为全面分析和研究细胞内部结构提供更加详尽的数据信息 。 2　荧光显微镜与荧光光谱仪耦合系统及特点 应用单臂光纤连接荧光显微镜与荧光光谱仪 ,实现荧光光谱测量和细胞实时成像二维信号的同时 采集 。以高频脉冲激光器作为激发光源激发显微镜下样品 ,使之发射出可见范围内的波长 ,呈现荧光映 像 。用荧光显微镜的物镜收集信号 ,通过单臂光纤将耦合好的荧光信号从荧光显微镜传导至荧光光谱 ( ) 仪 ,记录荧光发射光谱 。电感耦合相机 charged coup led device, CCD 摄像系统作为光电传感器用于显 微镜图像获取技术采集细胞图像 ,并将图像信号转换成电信号输入计算机进行数据读取及图像处理 ,获 取微区荧光光谱扫描谱图的详细信息 ,并对图像进行采集 、曝光调整 、多色彩空间的影像编辑 、预定义的 影像设置 、自动调焦 、自动后处理加工调整 ,获得色彩鲜艳 、清晰度高的影像 。应用光纤耦合荧光光谱仪 ( 与荧光显微镜 ,配合荧光图像扫描显微荧光光谱及进行微区荧光寿命的测定 超高时间分辨率 ,可得到 ) ( ) 复合物中不同组分的荧光寿命 ,优化升级了作为单一仪器的功能 。红敏光电倍增管 PM T 和红外 ( ) PM T切换使用满足超宽光谱范围探测 200 ～1700 nm ,适合从紫外到近红外波段荧光光谱的特性研 究 ,为生物体系中近红外荧光探针的开发应用研究提供了有力的支持 。 3　生物分析中的应用 荧光探针是设计用来进行生物标本特定区域内定位或对特定刺激反应的荧光团 ,可以高度敏感性 和选择性的检测复杂生物分子及活细胞中的特定成分 。相对于常规荧光检测而言 , 在近红外光区 , 生 收稿 ;