参蓉肺康散影响Lewis肺癌小鼠VEGF表达的实验研究.docVIP

精品论文 参考文献 参蓉肺康散影响Lewis肺癌小鼠VEGF表达的实验研究 卫 强 刘洪星 迟文成 金 岩 姜家康 （黑龙江中医药大学附属第一医院 ） 【中图分类号】R-33 【文献标识码】A 【文章编号】1672-5085 (2010)25-0321-03 【摘要】 目的 研究参蓉肺康散对小鼠Lewis肺癌抑制作用及对血管内皮生长因子（VEGF）表达的影响。方法 建立小鼠lewis肺癌模型并随机分组，分别给予不同处理，比较各组瘤体生长的重量，应用免疫组化法比较观察VEGF在各组中的表达。结果 参蓉肺康散对C57BL /6小鼠的Lewis肺癌的瘤体生长有一定的抑瘤作用,抑制小鼠lewis肺癌VEGF表达作用，其与顺铂的单独治疗作用相差不明显，而当其与化疗药物顺铂的抑瘤作用有相加效果。结论 参蓉肺康散可通过抑制lewis肺癌小鼠VEGF表达以抑制肿瘤生长。 【关键词】 参蓉肺康散 lewis肺癌 VEGF 免疫组化法 传统医学认为肿瘤的发病机制为气阴先虚，脏腑功能失调，邪毒乘虚而入，肺气郁结，宣降失司，气机不畅，气滞血瘀，阻塞络脉，津液输布不利，壅结为痰，痰瘀交阻，从而形成肺癌肿块，参蓉肺康散即是针对此病机而研制的方药，经过长期临床观察取得了较好的疗效，该方能够改善患者生活质量，促进肿瘤病灶稳定，减少转移发生，同时能为化疗增效。为了进一步研究参蓉肺康散的抗肿瘤作用机制，我们选用Lewis肺癌荷瘤小鼠模型,观察该方及与化疗药物顺铂（DDP）合用对肿瘤的抑制作用。 1　材料与方法 1.1C57BL /6雄性小鼠,体重(18 -20) g,由哈尔滨医科大学实验动物中心提供。Lewis肺癌荷瘤小鼠购自长春肿瘤研究所。 1.2药物 顺铂（DDP）20 mg/支，山东齐鲁制药有限公司生产，批号：7050172DC。 参蓉肺康散：1.75g/装，黑龙江省久久药业特制提供。其主要成分为西洋参 、肉苁蓉 、黄芪 、沙参、麦冬等经特定的制备工艺和流程提纯制成。 生理盐水：500ml，哈尔滨制药六厂生产。 1.3试剂和设备 用超净工作台SW-GIF：中国苏州净化设备厂；超低温冰箱MDF-328：日本三洋公司；超薄切片机：日本OLYMPUS公司；透射电子显微镜：H－600日本日立公司；电子分析天平：AB-204-N梅特勒托利多有限公司；兔抗鼠Fas多克隆抗体/兔抗鼠FasL多克隆抗体/兔抗鼠VEGF多克隆抗体：美国SantaCruzBiotech公司产品；SP试剂盒：美国Zymed公司产品；DAB显色试剂盒：武汉博士德公司；PV ndash; 6001/6002/6003二步法免疫组化检测试剂及浓缩型DAB试剂盒均购自中杉金桥。 1.4Lewis肺癌模型制备 将Lewis肺癌荷瘤小鼠后脱颈处死，在超净工作台上分离瘤体，将实体瘤部分放入75％酒精浸泡消毒10 min后，取生长良好、无坏死的肿瘤组织，用生理盐水洗净后剪碎加生理盐水研磨，过300目尼龙网制成单细胞悬液。将6周龄的C57BL/6小鼠四肢固定于操作台上；取小鼠两前腋窝连线下0.5cm，脊柱正中线右侧旁开0.3cm处为进针处；进针方向指向右前腋窝，进针深度0.5cm，注射0.2ml瘤细胞悬液。 1.5实验分组及给药方法 方法：将175只C57BL小鼠随机分为7组即空白组、对照组、低剂量中药组、中剂量中药组、高剂量中药组、顺铂（DDP）组、中药+顺铂组，（除空白组其余小鼠均接种Lewis肺癌细胞，建立lewis肺癌模型）每组25只。空白组与对照组不给任何药物；低剂量中药组：给予0.438g/ kg参蓉肺康散灌胃；中剂量中药组：给予0.875g/ kg参蓉肺康散灌胃；高剂量中药组：给予1.75g/ kg参蓉肺康散灌胃；顺铂组：腹腔注射3 mg/kg DDP, 中药+顺铂组：给予0.875g/ kg参蓉肺康散灌胃、腹腔注射3 mg/kg DDP。（中药组每日灌胃1次每次0.2ml,连续14d;顺铂组于接种后第2天起隔日腹腔注射一次每只0.3ml,共7次；中药+顺铂组：于接种后第2天起隔日腹腔注射DDP+中药灌胃一次,共7次。） 1.6观察指标 1.6.1计算抑瘤率[1]　接种14天后脱颈椎法处死动物,完整剖取肌肉上接种的瘤块,用电子天平称取重量, 用中性福尔马林固定备用,按公式:抑瘤率= (对照组平均瘤重- 给药组平均瘤重) /对照组平均瘤重times;100% ,计算抑瘤率。 1.6.2用免疫组化法检测VEGF表达 肿瘤组织用福尔马林固定12h后，石蜡包埋待用，