实时荧光定量PCR在中药材蕲蛇中的鉴别应用.docVIP

精品论文 参考文献 实时荧光定量PCR在中药材蕲蛇中的鉴别应用 黄林杰 罗达龙 黄琳 　　（梧州食品药品检验所 广西 梧州 543002） 　　【摘要】 目的：探讨实时荧光定量PCR对蕲蛇样品真伪鉴别的准确性。方法：采用实时荧光定量PCR法从蕲蛇正品、混伪品中提取DNA,进行引物扩增，并通过Cq值和扩增曲线对样品真伪进行判断。结果：3批蕲蛇正品的Cq值均低于30，曲线有明显的指数增长期；2批混伪品无Cq值，曲线为一直线。结论：本方法鉴别蕲蛇操作简单，准确率高，重现性好，可行有效。 　　【关键词】 实时荧光定量；PCR；蕲蛇；鉴别 　　【中图分类号】R28 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2016）16-0045-02 　　Application of real-time fluorescent quantitative PCR in the Identification of traditional Chinese medicine AgkistrodonAcutus 　　 HuangLinjie,LuoDalong,Huang Lin. WuzhouInstitute for Food and Drug Control,Guangxi, Wuzhou 543002,China 　　【Abstract】Objective To investigate the accuracy of real-time fluorescence quantitative PCR in the identification of the samples of Agkistrodonacutus.Methods DNA of the AgkistrodonAcutus and its adulterants were extracted by real-time fluorescence quantitative PCR,and primers were amplified.And through the Cq value and amplification curve to determine the authenticity of the sample. Result The 3 batches of Agkistrodonauthentic,sCq values were lower than 30, and the Curve had obvious growth period.There was no Cq value, and the curve was a straight line for the 2 batches of mixed adulterants.Conclusion This method is simple to identify AgkistrodonAcutus, high accuracy, good reproducibility, feasible and effective. 　　【Key words】Real-time fluorescence quantitative;PCR;Agkistrodonacutus; Identification 　　蕲蛇为为蝰科类动物五步蛇的干燥体,具有祛风、通络、止痉的功效[1]。由于其药用价值较高，导致近年来被大量捕捉，药材资源不断减少，大量伪品充斥着市场，质量问题日益严重。传统的蕲蛇药材的鉴别，主要是对其头部、鳞片和骨骼的形态特征进行性状鉴别，这对实验人员的中药材鉴别经验及蕲蛇药材的完整性要求较高。随着分子生物学的发展，使得中药材的分子遗传标记鉴别成为可能。目前，文献上已有聚合酶链式反应（PCR）法应用于药材鉴别的介绍。本文采用实时荧光定量PCR（以下简称qPCR），通过硅胶柱法提取蕲蛇的DNA，利用PCR荧光探针法鉴别真伪，较普通PCR法（电泳法）具有操作简单、时间短、准确率高，不易造成污染的特点，具有较好的应用前景。 　　1.材料与仪器 　　1.1 材料 　　1.1.1蕲蛇正品及伪品 蕲蛇正品1、2来源于安徽亳州中药材市场，蕲蛇正品3及混伪品金钱白花蛇、赤链蛇均来源于广西玉林中药材市场，并经过形态学鉴定。 　　1.1.2试剂 动物组织基因组DNA提取试剂盒（购自广州迪奥生物科技有限公司，型号：DePure Tissue DNA Kit），SuperReal荧光定量预混试剂增强版（购自TIANGEN，型号：FP205），内含2 x SuperRealPreMix Plus（with SYBR Green I）和RNase-Free ddH2O，蕲蛇