pRV-Display-NY-ESO-1真核表达质粒的构建及其在Myc-CaP细胞株中的稳定表达.pdfVIP

·2667· 史堡塞坠处型苤圭!!!!生!!旦笠j!鲞筮!!塑些也』垦!P塾坚：望!!!磐!竺!!!!：!!!：!!：丛!：!! ·泌尿外科· pRV—Display—NY—ESO一1真核表达质粒的 构建及其在Myc—CaP细胞株中的稳定表达 谢冲王国民 【摘要】 目的构建pRV—Display．NY—ESO一1真核表达质粒，建立并检测稳定表达纽约人食管 从Genbank查找NY—ESO一1基因全长序 鳞状细胞癌抗原(NY—ESO．1)的Myc—CaP细胞株。方法 列，聚合酶链反应(PCR)扩增目的片段，克隆至pDisplay载体，构建pDisplay—NY—ESO—l真核表达质 粒，双酶切证实NY—ESO一1插入后，PcR扩增并定向连人pRV载体，构建pRV—Display—NY—ESO一1真 核表达质粒，同时构建pDisplay一绿色荧光蛋白(GFP)作为阳性对照。经酶切、测序鉴定后，用 blot和流 Phoenix细胞产生逆转录病毒，脂质体转染法将重组质粒转入Myc—CaP细胞，并用Western 经PCR、测序鉴定成功构建 式细胞术鉴定稳定转染的Myc—CaP细胞中NY—ESO-l的表达。结果 pRV—Display．NY—ESO一1真核重组质粒。表达GFP的Phoenix细胞和Myc—CaP细胞在倒置荧光显微 镜下均可见绿色荧光。Western blot检测Myc—CaP细胞中NY—ESO一1表达阳性，流式细胞术鉴定携带 目的基因的Myc—CaP细胞纯度均大于80％。结论pRV—Display—NY—ESO一1真核重组质粒稳定高表 达于Myc—CaP细胞。 纽约人食管鳞状细胞癌抗原； 重组质粒； 构建 【关键词】 Myc—CaP细胞； Constructionof anditsstabletransfectedcell PRV．Display．NY．ESO．1eukaryoticplasmid Myc—CaP line Xie InternationalPeace Chong+．耽喟Guomin．‘DepartmentofAndrology，the Maternity m砌Health 200030，China Hospital，ShanghaiJiao％喟University，Shanghai Correspondingauthor：WangGuomin，Email：wang．guomin@嚣一hospital．sh．cn Toconstructthe eukaryotie estab— 【Abstract】Objective pRV—Display—NY—ESO一1plasmid，and full lish celllinetransfectedwithNY—ES0一1．MethodsThe ofNY—ES0—1was Myc—CaP sequence get fromGenbankand chainreaction(PCR)．Insertthe into eu— amplifiedbypolymerase fragmentsp-Display vector．Therecombinantwith