TM4SF1真核表达载体的构建及其对结直肠癌细胞株生物学功能的影响.pdfVIP

J South Med Univ, 2014, 34(6): 847-851 doi 10.3969/j.issn. 1673-4254.2014.06.19 ·847 · 基础研究 TMTM44SFSF11 真核表达载体的构建及其对结直肠癌细胞株生物学功真核表达载体的构建及其对结直肠癌细胞株生物学功 能的能的影响影响 1 1 1 1 1，2 王 丹 ，陈 娜 ，彭 曼 ，徐 琼 ，周 军 1 2 南方医科大学 基础医学院病理学系，南方医院病理科，广东 广州 510515 摘要：目的构建TM4SF1 的真核表达载体并研究其对结直肠癌细胞株HCT 116、DLD 1迁移及侵袭功能的生物学特性影响。方 法 根据GenBank ：BC034145.1 中的TM4SF1 的序列设计两条引物，用逆转录的方法获得开放阅读框（ORF 区），并将其连接到 质粒上，经鉴定后瞬时转染结直肠癌细胞株HCT 116及DLD 1，应用Western blot 及细胞免疫化学方法检测其转染效果及表达情 况，采用划痕及transwell 实验观察其对细胞迁移及侵袭能力的影响。结果 成功构建PEZ-M29/TM4SF1 真核表达载体， Western blot 及细胞免疫化学实验结果显示TM4SF1表达上调可以促进结直肠癌细胞株的迁移及侵袭能力。结论 成功构建 TM4SF1真核表达载体，TM4SF1 的上调表达可提高结直肠癌细胞株HCT 116、DLD 1 的迁移及侵袭能力，提示TM4SF1与结直 肠癌侵袭转移密切相关，为进一步阐明TM4SF1在结直肠癌转移中的作用及相关机制奠定基础。 关键词：TM4SF1；迁移；侵袭 Construction of a eukaryotic expression vector of TM4SF1 and its effect on migration and in- vasion of colorectal cancer cells 1 1 1 1 1, 2 WANG Dan , CHEN Na , PENG Man , XU Qiong , ZHOU Jun 1 2 Department of Pathology, School of Basic Medical Sciences , Department of Pathology, Nanfang Hospital , Southern Medical University, Guangzhou 510515, China Abstract: Objective To construct a eukaryotic expression vector of transmembrane-4-L-six-family- 1 (TM4SF1) gene and study its effect on the migration and invasion of colorectal cancer cells. Methods A pair of specific primers of TM4SF1 gene (GenBank: BC034145.1) was used to acquire the open reading frame of TM4SF1 by RT- PCR. The amplified sequence was ligated to a PEZ-M29 vector, which, after identification, was transiently transfected in colorectal cancer cell lines HCT116 and DLD1. Western blotting and immunocytochemistry were used to analy