芦丁和槲皮素的化学检识（二）.pptVIP

芦丁的鉴别及含量测定 小组成员：陈丽、陈惠渝、 黄雄、李钰川 实验目的 熟悉黄酮类化合物的化学检识的常用方法 掌握芦丁紫外吸收光谱测定的方法与原理 学习用紫外分光光度法测定芦丁提取物的含量 实验原理芦丁和槲皮素的化学检识 1.对不同强度碱液的溶解度试验 2.浓硫酸和浓盐酸反应 3.Molish反应 4.盐酸-镁粉试验 5.FeCl3反应 6.AlCl3反应 实验原理 对不同强度碱液的溶解度试验： 黄酮类化合物因分子中多具有酚羟基，故显酸性，可溶于碱性水溶液、吡啶、甲酰胺及二甲基甲酰胺中。由于酚羟基的数目及位置不同，酸性强弱也不同。以黄酮为例，其酚羟基酸性强弱顺序依次为： 7,4‘-二OH7-或4’-OH一般酚OH5-OH3-OH 因此，酚羟基的数目及位置不同的黄酮类化合物酸性不同，在不同强度碱液中的溶解度也不同。 实验原理 浓硫酸和浓盐酸反应： γ-吡喃环上的1-氧原子，因有未共用的电子对，故表现微弱的碱性，可与强无机酸，如浓硫酸、盐酸等生成盐，但生成的盐极不稳定，加水后即可分解。 另外，黄酮类化合物溶于浓硫酸中常常表现出特殊的颜色，可用于鉴别。 实验原理 Molish反应： 糖在浓硫酸或浓盐酸的作用下脱水形成糠醛及其衍生物与α-萘酚作用形成紫红色复合物，在糖液和浓硫酸的液面间形成紫环，因此又称紫环反应。 　　Molish反应可以鉴定单糖的存在。 实验原理 盐酸-镁粉试验： 盐酸-镁粉反应的机制过去解释为由于生成了花色苷元所致，现在认为是因为生成了阳碳离子的缘故。 FeCl3及AlCl3反应： 黄酮类化合物分子中常含有下列结构单元，故常可与铝盐、铅盐、锆盐、镁盐等试剂反应，生成有色络合物。 实验原理 苯甲酰基 桂皮酰基 黄酮类化合物结构中的交叉共轭 芦丁的紫外吸收光谱的测定： 实验原理 芦丁的紫外吸收光谱的测定 多数黄酮类化合物由两个主要吸收带组成： 带I在300-400nm区间，由B环桂皮酰系统的电子跃迁引起。 B B 实验原理 带II在240-285nm区间，由A环苯甲酰系统的电子跃迁所引起。 A A 实验原理 苯甲酰基 桂皮酰基 黄酮类化合物结构中的交叉共轭 芦丁的紫外吸收光谱的测定： 说明： （1）+NaOMe或NaOAc, OH?ONa，变为离子化合物，共轭系统中的电子云密度增加，红移 另有3,4’-OH或3,3’,4’-OH时，在NaOMe作用下易氧化破坏，故峰有衰减。 （2）NaOAc为弱碱，仅使酸性较强者，如7,4’-OH解离。 实验原理 芦丁的紫外吸收光谱测定 （3） 形成络合物的能力： 黄酮醇3-OH 黄酮5-OH（二氢黄酮5-OH） 邻二酚羟基 二氢黄酮醇5-OH 邻二酚羟基和二氢黄酮醇5-OH在酸性条件下不与AlCl3络合； 但不在酸性条件下，五者皆与Al3+络合； 形成络合物越稳定，红移越多。 （4） 根据只加AlCl3和加入AlCl3及盐酸的紫外光谱吸收峰位相减的结果，可以判断邻二酚羟基的取代情况。 ? 带II(240-285nm)（苯甲酰系统） 带I(300-400nm) 桂皮酰系统 类 型 说 明 ? ? 250-285 304-350 黄酮类 ? -OH越多，带I带II越红移 ? B环3’,4’有-OH基，带II为双峰（主峰伴肩峰） 328-357 黄酮醇类 (3-OR) ? 352-385 黄酮醇类(3-OH) ? 245-270 270-295 300-400 异黄酮类 二氢黄酮（醇） B环上有-OH, OCH3对带I影响不大 ? 220-270 340-390 或340-390(Ia) 300-320(Ib) 查耳酮类 查耳酮2’-OH使带I红移的影响最大 370-430(3-4个小峰) 橙酮类 ? 加入试剂 带II 带I 说明 样品+甲醇 （黄酮类及黄酮醇类） 250-285 304-385 两峰强度基本相同，具体位置与母核上电负性取代基(-OH, -OCH3)有关，-OH, -OCH3越多，越长移 ? ? ? +NaOMe A环有-OH，红移小，无意义 ?40-60nm（?不变或增强） ?50-60nm（?下降） 有4’-OH，无3-OH ? 有3-OH，无4’- OH 有3,4’-OH或3,3’,4’-OH（衰减更快） ?? 7-OH 带I，II随加NaOMe时间延长，逐渐衰减 ? 320-330nm有吸收，成苷后消失 +NaOAc (未熔融) ?5-20 在长波一侧有明显的肩峰 7-OH 加入诊断试剂后引起的位移及结构测定