白斑症病毒(WSSV)对克氏原螯虾血细胞的感染规律.pdfVIP

第40卷第9期 中国海洋大学学报 40(9)：056～060 2010年9月 PERIoDICALoFoCEANUNIVERSITY0FCHINA Sep．，2010 王轶南，战文斌“，唐小千，邢婧 (中国海洋大学海水养殖教育部重点实验室，山东青岛266003) 摘要： 用WSSV粗提液注射感染克氏原螯虾，感染后每24h采集螯虾血细胞。血细胞经与抗WSSV单克隆抗体及 FITC标记的羊抗鼠抗体结合反应后，应用流式细胞仪检测WSSV对血细胞的感染，同时记录螯虾累积死亡率及血细胞密 度。结果表明，感染WSSV后螫虾1～7 5d血细胞被感染比例分别为6．47％，6．93％，10．65％，26．08％和4．94％；1～5d被感染细胞的平均荧光强度分别为 10．7，10．89，11．71，13．77和15．47；l～6 WSSV后螯虾血细胞密度呈现先升后降的趋势，至感染后第6天血细胞密度仅为对照组的21．3％；被感染血细胞内的病 毒量始终呈上升趋势、达到最高感染率时螯虾处于濒夕E状态，表明血细胞的WSSV感染与螯虾死亡密切相关。 关键词： 克氏原螯虾；血细胞；对虾白斑症病毒 中图法分类号：$917 文献标志码： A 文章编号： 1672—5174(2010)09一056一05 对虾白斑症病毒(WSSV)病流行广泛、危害严重，自体长8～10cm，体质量20～25g，经PCR检测为 暴发以来的近20a一直倍受关注[1宅]。目前，探明 WSSV阴性，实验前经5d暂养。自然感染WSSV的 WSSV致病机理、寻找预防和控制该病已逐渐成为研究 对虾取自乳山对虾养殖场，于一80℃保存。抗WSSV 的热点睁4|。已有研究表明血细胞是WSSV侵染的主要 单克隆抗体为本实验室研制[12J。异硫氰酸荧光素 靶细胞，并在病毒对各组织器官的感染中起重要作 (FITC)标记的羊抗小鼠Ig购自Sigma公司。 用睁6|，因此研究WSSV对宿主血细胞的感染特性及其 1．2螯虾的人工感染 与宿主死亡的关系，对了解WSSV致病机理具有重要意 将螯虾分为感染观察组及感染流式检测取样组， 义。研究发现斑节对虾(Penaeusmonodon)、凡纳滨对虾 并分别设WSSV感染组与对照组。将自然感染 (Litopenaeusvannamei)、墨吉对虾(Penaeusmerguien— WSSV对虾的鳃与0．01mol／L磷酸盐缓冲液(PBS， sis)、宽大太平螯虾(Pacifastacusleniusculus)以及印度 对虾(Penaeusindicus)等感染WSSV后血细胞数量均发 min，4℃；800×g，15min，4℃)后，取上 (400×g，15 生变化睁9|，并且不同类型血细胞对WSSV的易感性存 清用无菌PBS稀释1000倍，经0．45肛m微孔滤膜过 在差异[7,10]，此外，感染WSSV后的斑节对虾和印度对 滤除菌，经螯虾的腹部皮下注射感染，每尾50止，阴性 虾血细胞具有明显的细胞程序性坏死现象[9]。本研究 对照组注射同体积无菌PIgS，空白对照不注射(见表1)。 的前期成果是应用抗WSSV的单克隆抗体和FITC标记 表1人工感染及实验分组 的羊抗鼠抗体的免疫荧光技术及流式细胞仪检测了24