人参总皂苷（GS）合Ber对慢性心衰大鼠α-MHC，β-MHC表达的影响.docVIP

精品论文 参考文献 人参总皂苷（GS）合Ber对慢性心衰大鼠α-MHC，β-MHC表达的影响 黑龙江中医药大学 哈尔滨 150040 摘要：目的 探讨观察人参总皂苷合黄连小檗碱对慢性心衰大鼠alpha;-MHC，beta;-MHC（心肌肌球蛋白重链）表达的影响。方法 建立慢性心衰大鼠模型，并将其随机分成模型组、卡托普利组和GS+Ber组，另设正常对照组；1个月后通过荧光定量PCR对慢性心衰大鼠心肌肌球蛋白重链mRNA表达进行检测。结果 GS+Ber组alpha;-MHC mRNA的表达明显高于模型组，beta;-MHC mRNA的表达明显低于模型组，差异有统计学意义（Plt;0.05）。结论 人参总皂苷合黄连小檗碱能够具有潜在慢性心衰治疗价值。 关键词：慢性心衰；人参总皂苷；黄连小檗碱；alpha;-MHC；beta;-MHC 神经内分泌介导的心室重构是慢性心衰（CHF）基本机制，研究表明防治慢性心衰的重点是改善心肌生物学性能[1]。慢性心衰大鼠，alpha;-MHC mRNA的表达将显著降低，同时beta;-MHC mRNA的表达将显著升高，心肌细胞出现由alpha;-肌球蛋白重链向beta;-肌球蛋白重链的异常转化[2]。本研究通过对慢性心衰大鼠进行GS+Ber灌胃，观察其对alpha;-MHC和beta;-MHC表达的影响，具体报道内容如下。 1.材料和方法 1.1材料 清洁级雄性Wistar大鼠（由本院动物实验中心提供）50只，体重为210~250g；人参皂苷（Rb1对照品）购自中国药品生物制品检定所；黄连小檗碱购自南京替斯艾么中药研究所；Go Taq qPCR Master Mix购自上海睿安生物科技有限公司；Trizol试剂购自 Invitrogen公司（美国）；卡托普利购自常州制药厂有限公司；异丙肾上腺素购自上海禾丰制药有限公司；红参、黄连为是市售（已成功提取出GS和Ber，并纯化）。 1.2方法 1.2.1建立动物模型及分组 随机选择40只大鼠，连续12天进行大量异丙肾上腺素（ISO）皮下多点注射，首日剂量为20mg#8729;kg-1，次日剂量为10mg#8729;kg-1，以后每日剂量为5mg#8729;kg-1。剩余大鼠作为正常对照组，采用等量蒸馏水皮下注射。通过检测造模大鼠与正常大鼠血流动力学相关指标，判断模型是否建立，将建模后大鼠随机分成模型组：以蒸馏水进行灌胃处理；卡托普利组：45ml#8729;kg-1#8729;d-1进行灌胃；GS+Ber组：20ml#8729;kg-1#8729;d-1灌胃。正常对照组采用蒸馏水灌胃处理，连续处理1个月。每组各12只大鼠。 1.2.2检测大鼠心肌肌球蛋白重链表达 具体检测步骤如下：①提取大鼠心肌细胞RNA并合成cDNA：取大鼠心肌组织50mg，采用超声破碎，根据Trizol试剂使用说明书提取总RNA，并使用OligdT15-18作引物反转录得到cDNA。②TaqMan水解探针和引物：根据alpha;-MHC与beta;-MHC差异区，自行设计alpha;-MHC、beta;-MHC及beta;-actin引物及探针，并由上海生工生物工程合成。③实时荧光定量PCR：体系为25mu;L，包括Go Taq qPCR Master Mix 12.5mu;L，引物（上下游）各1mu;L，探针和ROX Reference Dye 各0.5mu;L，和1mu;L cDNA，加灭菌蒸馏水补充至25mu;L，涡旋振荡混匀，并进行Real-time PCR，同时设置空白对照和阴性及阳性对照，模板分别为水和大鼠心肌细胞RNA及DNA，每个样品均重复三次，记录其CT值，数据通过2-Delta;Delta;CT法分析。 1.3统计学方法 数据通过SPSS13.0软件进行分析。若数据方差不齐（或不符合正态分布），通过轶和检验以中位数M表示，当Plt;0.05时，差异在统计学方面有意义。 2.结果 如表1所示，GS+Ber组alpha;-MHC mRNA的表达明显高于模型组，beta;-MHC mRNA的表达明显低于模型组，差异有统计学意义（Plt;0.05）；卡托普利组beta;-MHC mRNA的表达明显低于模型组（Plt;0.05），其他差异不显著（Pgt;0.05）。 3.讨论 人参和黄连均具有良好调和心脾功效，临床广泛使用人参与黄连配伍治疗慢性心衰。研究表明，GS对脂质代谢有一定调节作用，以起到抗动脉粥样硬化