不同检测方法对痰液标本中结核杆菌检测效果的比较分析.docVIP

精品论文 参考文献 不同检测方法对痰液标本中结核杆菌检测效果的比较分析 赵志英1 刘振波2 (1湖南省桃江县疾病预防控制中心 湖南益阳 413400) (2湖南省益阳市资阳区大潭口血防站 湖南益阳 413000) 【中图分类号】R521 【文献标识码】A【文章编号】1672-5085（2013）18-0137-02 【摘要】 目的 比较不同检测方法检测痰液标本结核分支杆菌的检测效果。方法　80份拟诊为肺结核患者的痰液标本分别采用涂片抗酸染色法、快速结核菌培养法和荧光定量PCR技术对痰结核分枝杆菌进行检测，并对其检出率进行比较。结果　RT-PCR法、菌培养法、染色法的检出率分别为93.75%、71.25%、56.25%。RT-PCR检出率高于菌培养法及染色法，菌培养法检出率高于染色法。结论　荧光定量PCR技术能对痰结核分枝杆菌进行简便快速、敏感、特异的检测，值得推广应用。 【关键词】结核分枝杆菌 痰液标本 涂片抗酸染色法 菌培养法 荧光定量法(RT-PCR) 肺结核是由结核分枝杆菌引发的肺部感染性疾病，严重威胁人类的健康，是单病因所致的感染性疾病中死亡率最高的疾病。从痰液中检测结核分枝杆菌检查对肺结核早期诊断、发现传染源、确定治疗方案及观察疗效等意义重大。本文运用三种方法对80份拟诊为肺结核患者的痰液标本进行检测，并对其检出率进行比较，以期为临床提供更科学有效的检测方法。 1 材料与方法 1.1 标本采集 选择拟诊为肺结核的患者痰液标本80份，嘱患者清晨用生理盐水嗽口，咳痰，第一口痰弃去，取深部咳痰三口分装于3个无菌细菌培养标本盒内送检。 1.2 试剂与仪器 显微镜、萋-尼氏染色试剂(按文献［1］的方法自行配制)、痰消化液、pH6.8的磷酸盐缓冲液、结核分枝杆菌PCR荧光定量检测试剂盒、DA7600荧光定量PCR仪、低温高速离心机、生物安全柜、BacT/ALERT 3D全自动分枝杆菌培养检测系统等。 1.3 标本检测方法 1.3.1涂片抗酸染色法 所有操作严格按照《抗酸杆菌涂片检查操作程序》(中国疾病预防控制中心结核病防治临床中心与国家结核病参比实验室制订)进行。 1.3.2 快速结核菌培养法 取适量痰标本，采用痰消化液消化。视标本性状，加1～2倍体积的处理液于无菌痰杯中，使痰液充分液化，加入磷酸盐缓冲液震荡，低温离心机离心，取沉淀加0.2%牛血清1mL，混匀孵育。取0.5mL加入到无菌BacT/ALERT 3D培养管(预先以75％乙醇消毒瓶口，待自然风干后，加入0.5mL抗生素补充剂)，以上操作均在生物安全柜内进行。 1.3.3 荧光定量PCR技术 取痰标本，加入痰消化液室温液化30min，取适量液化后痰液标本，高速低温离心。 弃上清液，沉淀用无菌生理盐水1mL打匀，低温离心，重复洗涤1次，再次低温离心，弃上清液，沉淀加入DNA提取液，充分混匀后沸水浴10min，高速离心10ml，取0.5ml样本加入到PCR管内，设置反应体系，扩增完计算机自动分析，建立标准曲线，计算出标本中扩增片段的拷贝数。 1.4统计学处理 数据处理采用SPSS16.0统计学软件处理，计数资料采用X2检验，计量资料采用t检验。 2 结果 RT-PCR法结核分枝杆菌检出率高于染色法及菌培养法，菌培养法检出率高于染色法。详细数据见表1。 表1 三种检测方法痰结核分枝杆菌检出率 检测方法 例数n 检出例数（%） 染色法 80 45（56.25） 菌培养法 80 57（71.25） RT-PCR法 80 75（93.75%） 注：RT-PCR法与染色法、菌培养法比较，P＜0.05；染色法与菌培养法比较，P＜0.05；均有显著性差异。 3 讨论 肺结核是由结核分枝杆菌引发的肺部感染性疾病，严重威胁人体健康。检查痰液中是否含有结核杆菌，是临床诊断或鉴别肺结核的重要依据。痰液中结核杆菌的检查方法，通常采用涂片抗酸染色法和快速结核菌培养法。染色法检测阳性率低，灵敏度和特异性也较差，检测结果受送检标本质量的影响，常出现漏检情况，菌培养法所需时间较长，阳性率较低，不利于肺结核的早期诊断和及