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L012 纳豆激酶的分离纯化及酶学性质的研究
高大海， 梅乐和， 林东强， 姚善泾
（浙江大学化学工程与生物工程学系，杭州 310027 ）
摘 要 利用产纳豆激酶的Bacillus subtilis 进行深层发酵。采用发酵液离心除菌，20 ％～60 ％饱
和度硫酸铵沉淀，Superdex 75 凝胶层析和SP Sepharose Fast Flow 离子交换层析对活性组分进行
分离提纯，用纤维平版法测定活力，并用 SDS对分离纯化的效果进行了检验，结果在
SDS中观察到单一条带，纯化倍数和酶活回收率分别为8.4 和49% 。纳豆激酶的最适反应
温度为55℃，在pH6-12 的范围内有较好的稳定性，纳豆激酶能够直接降解纤维蛋白。
关键词 纳豆激酶 凝胶层析 离子交换 酶学性质
PURIFICATION AND CHARACTERIZATION OF
NATTOKINASE PRODUCED BY Bacillus subtilis
GAO Da-hai, MEI Le-he, Lin Dong-qiang, YAO Shan-jing
（Department of Chemical and Biochemical Engineering, Zhejiang University, Hangzhou 310027)
Abstract The optimized purification process includes the following steps: removing cells by the
centrifugation, 20%~60% saturation ammonium sulfate precipitation, gel filtration
chromatography with Superdex 75and ion-exchange chromatography with SP Sepharose Fast
Flow. SDSindicated that the final product obtained was homogeneous and had a molecular
weight around 27.7kD. The fibrinolytic activity of nattokinase was measured by means of fibrin
plate method. The purification factor and activity recovery of nattokinase was 8.4 and 49%,
respectively. The optimal reaction temperature of nattokinase was 55℃. From pH6 to pH12,
nattokinase exhibits high stability and can directly decompose the fibrin.
Keywords nattokinase, gel filtration, ion-exchange chromatography, characterization
引 言
血栓病威胁着人类的生命与健康，溶解血栓是治疗这类疾病的首选方法。但当前的溶栓
剂，如尿激酶、链激酶、重组组织型纤溶酶原激活剂等，存在半衰期短、副作用大、价格昂
贵等各种缺点 [1] 。1987 年须见洋行从纳豆中分离出纳豆激酶(nattokinase, NK)[2] 。研究表明，
联系人：梅乐和 meilh@zju.edu.cn
基金项目：国家自然科学基金资助项目）；浙江省科技计划资助项目（20040C33036 ）；浙江省回国人员基金资助项目；
教育部留学回国人员基金资助；中德合作DAAD-CSC 科技人员交流资助项目。
纳豆激酶是一种丝氨酸蛋白酶，能显著溶解血栓，并刺激静脉内皮细胞产生纤溶酶原激活剂
(t-PA) ,更有效地发挥溶栓效果[3] 。因此纳豆激酶是一种很有潜力的新型口服溶栓药物。
传统的纳豆激酶的分离方法主要是以纳豆为原料。由于初始样品中纳豆激酶的含量有
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