猪繁殖与呼吸综合征病毒河南分离株ORF5基因的克隆及在293T细胞中表达.pdfVIP

猪的传染病 2．2病毒鉴定 取第二代培养上清，制备RNA，以PRRsVN蛋白基因通用型检测引物进行RT．PCR． 结果都扩增到约300 bp大小的唯一条带(图略)。同时，以第二代培养上清感染MARC．145 细胞单层．3天后崮定，用针对PRRsvN蛋白的特异性单克隆抗体进行间接免疫荧光检测， 感染细胞的胞浆内都呈现出特异性黄绿色荧光。而对照细胞无特异性荧光(图略)。 2．3Nsp2基因变异的初步检测 取第二代培养上清，制备l讣n，以猪繁殖与呼吸综合征病毒(Nsp21594．1680变异株) RT-PCR检测试剂盒扩增Nsp2的部分编码区，结果与阳性对照～样，都扩增到400bp大小 的唯一条带(图略)。显示Nsp2编码区存在缺失。 2．4猪瘟病毒检测 无论是用EusA还是荧光RT-PcR都没有检测到猪瘟病毒。 3讨论 我们将来自不同地区的高热综合征发病猪场的病辩接种MARc．】45细胞后，分离到6 株病毒，经N蛋白基因的RT_PCR和间接免疫荧光试验鉴定为Pf艰SV。经调查，这6个养 殖场(户)从未使用过任何猪繁殖与呼吸综合征疫苗。另外，我们从相距很远的6个发病猪 场都分离到PRRsv，而且都有Nsp2的缺失，这与其他单位的研究结果一致