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疟原虫血片制作质量控制及疟原虫计数 云南省寄生虫病防治所 赵晓涛 赵晓涛疟疾防制科科长云南省消除疟疾暨全球基金疟疾项目副主管 电子邮箱：zxt_423@163.com zxt423@ 办公室：08792141182 手机QQ血片制作 血膜的制作 用于检查疟原虫的血涂片有两种：一种是将血液涂呈薄膜状，称薄血膜；一种是血液涂成圆盘状，称厚血膜。薄血膜上的血细胞要求平辅在玻片上面。 发热病人血片 标本片 血膜的制作（取血时间） 取血时机 现症病人一般可随时取血，疟疾普查时可不考虑取血时机。但在诊断或需要某期疟原虫作标本时，则应掌握适宜的取血时机。 间日疟在寒热发作时，外周血液中主要可见环状体期；发作后数小时，环状体发育到滋养体期，疟色素形成，形态较易辩认，为诊断的有利时机；36~48小时，可检出裂殖体；发作一、二次后，配子体出现较多。 恶性疟较理想的取血时间是在发作后至20小时内取血，初发患者退热后常查不到原虫。 血膜的制作（取血操作） 取血方法 采血部位一般人为耳垂，指头，通常在耳垂取血。先用75%酒精棉球消毒取血部位（冬季用手捻动耳垂使其充血后再行消毒），待酒精干后，用左手拇指和食指紧捏耳垂上方，右手持消毒采血针（一人一针，避免血传疾病）迅速刺入耳垂下端1~2毫米，不宜过深或过浅。然后用右手中指轻轻向上挤压出血。 将推玻片向1的方向稍抽回，当血液充满推玻片适当宽度后，以一定均匀的速度向2的方向滑动。 （涂片操作） 厚血膜 用推片的一角，从取血部位刮取约4微升血量（相当于火柴头大小），使血滴与平置的载玻片接触，再由里向外一个方向旋转，转2~4圈，涂成直径0.8~1厘米大小圆形厚血膜，血膜厚薄均匀，过厚易于脱落，过薄达不到检出率的要求。 血涂片质量评价： 均匀、厚薄、头体尾、两侧 注意：血滴大，速度快、角度大----血膜厚 血滴小，速度慢、角度小----血膜薄 血膜的制作（涂片操作） 涂制厚、薄血膜的位置 通常是将厚、薄血膜涂在一张载片上。方法是将载片分为6等分，第1、2格备贴标签及编号用；厚血膜涂在第3格中央，薄血膜涂在第4格前缘至第6格中部。作为标本的血片每张玻片涂厚、薄血膜各1个；门诊和发热病人血片每片1人，涂 涂2个厚血膜1个薄血膜，以 防血膜脱落而影响检查； 疟疾调查时，每张玻片 可涂制2~3人血膜。 标本片 发热病人血片 标签 标签 血膜的制作 血膜编号 血膜制成后，立即用特种蜡笔或水笔于玻片面上写上受检者的号码，以防差错，待薄血膜干后再用铅笔于薄血膜中写上血片种类的代号和受检者的个人编号，依次顺序插入标本盒内。 制作血膜的注意事项 1. 玻片清洗时，避免玻片碰撞、磨损。制作血膜的载玻片必须完全清洁而毫无油渍或污垢。制片时，手指只能持载片的边缘，不能接触玻片表面，以免油污使薄血膜产生空白区以及厚血膜脱落。作为推片的玻片边缘一定要平滑，才能使推出的血膜均匀一致。 制作血膜的注意事项 2. 刚涂制的血膜要平放在标本盒内，厚血膜未干前勿使标本盒倾斜，以免血膜倾向一侧，造成血膜厚薄不均，厚处不易溶血和着色而影响检查结果；晾干血膜时应注意防尘、防止苍蝇、蟑螂等昆虫吮吸血膜，干后应及时装入标本盒并盖严，新的木制标本盒需敞开放置一段时间，让木醇挥发后才能使用，以免厚血膜红蛋白被其固定，不能溶血或染色效果不佳。 制作血膜的注意事项 3. 血膜让其自然干燥，切忌用太阳晒或火烤，干透后才能用甲醇固定薄血膜。夏天标本尽可能24~48小时内固定染色；冬天也不能超过72小时。放置时间越久，厚血膜越不易脱血，染色效果也差。若不能及时染色，薄血膜宜先用甲醇固定（1~3分钟）然后用过滤清水对厚血膜溶血，晾干固定后装入盒内盖严，待以后染色。 镜检疟原虫血片的染色一、染液的种类及染色原理 染液种类： 对镜检疟原虫染色虽然种类名称很多，但都是从罗门诺夫斯基氏创造的多色性染液变化过来的。 多色性染液可分为水溶液和醇溶液两类。水溶液类有罗氏（Romanowsky）染液、费氏(Field)染液等；醇溶液有吉氏（Giemsa）染液、瑞氏（Wright）染液等。 镜检疟原虫血片的染色（一）染液的种类 醇溶液类: 有吉氏（Giemsa）染液、瑞氏（Wright）染液等。是在水溶液染液的基础上改进发展而成。目前我们推荐的是运用醇溶液类中的吉氏（Giemsa）染液 镜检疟原虫血片的染色（二）染色的原理 染色原理是染料于被染物的阴阳离子互相吸附而结合的一种化学反应。