抗体简介.ppt

3．基因工程方法 ?????? 把两个抗原结合特异性不同的Fab片段，通过二硫键 连接起来，形成一种双功能抗体。 ???? 构建抗体融合蛋白的原则 ?????? 第一个蛋白的终止子密码子删除（特异性抗体），再接上带 终止子密码子的第二个蛋白基因，即实现两个基因共表达。 ???????? 3．5?抗体融合蛋白 ???????? 例 生物导弹 优点：抗体融合蛋白能特异定位于肿瘤的局部，并输送高浓度 的IL-2（高出6倍），减少IL-2对周身的副作用。 ???????? ???????? 鼠源性抗体的改造，就是在保持其特异性抗原结合作用的前题下，尽可能的去除不利部分（免疫原性）。 第四节 基因工程抗体和抗体工程 4．1 抗体研究领域的发展 分三个阶段 1890年 Behring白喉抗毒素的发现 ??????? 特点：用抗原免疫动物获得多克隆抗体 1975年 Kohler 创建杂交瘤技术 ??????????? 特点：制备出单克隆抗体 1994年 Winter 基因工程法制备抗体 ????????? 特点：不用免疫动物和细胞融合技术，就可制备抗体。 过程： 不同的VH或VL基因重组，得到无数种抗体。 抗体文库可达到或超过1011库容, 所以能包含B细胞全部克隆。 ? 4．2 噬菌体的抗体库构建 抗体基因插入噬菌粒中,构成噬菌体抗体库。 噬菌粒：具有噬菌体和质粒的共同特点。大容量、高效。 例 pHEN1 特点：含有一个琥珀终止密码 ? E.coli (SupE+) ：琥珀突变终止密码子抑制菌株 ? E.coli (SupE-) ：非琥珀突变终止密码子抑制菌株 ? 1．当噬菌粒感染E.coli (SupE+) 琥珀终止密码（UAG）被抑制，翻译出谷氨酸，抗体和噬菌体外壳蛋白以融合蛋白的形式表达在噬菌体的表面。 ???? 一般噬菌粒感染E.coli (SupE+)，使抗体蛋白在噬菌体表面，有利于鉴定 。 抗体基因插入噬菌粒中,构成噬菌体抗体库。 2．当噬菌粒感染E.coli (SupE-) ????? 琥珀终止密码（UAG）解抑制，翻译为终止密码子，外源抗体蛋白，以可溶性蛋白形式表达。 ??????确定了目的克隆抗体后，就可再感染E.coli?(SupE-)的菌株，进行可溶性蛋白表达，用Western blot分析确定，完成了文库构建的全过程。? Western blot 1．??抗体文库容量大，可达到或超过1011 2．??避开了人工免疫和杂交瘤技术 3．??亲和力高 ? ? 4．3??噬菌体抗体文库特点 　 ? ? 1．原核细胞表达 融合表达、分泌表达 2．真核细胞表达 分泌型表达 3．转基因植物表达 4．转基因动物表达 ? ? 4．4 基因工程抗体表达 第五节? 抗体诊断试剂 ? 概念--抗体反应特点?? ????? 抗原抗体特异性结合，在体内或体外均可呈现某种反应。 体内：溶菌、杀菌、促进吞噬、中和毒素 （故抗体类药物可用于治疗）。 体外：根据抗原特性，可发生凝集、沉淀反应 ???? （故用已知抗体来鉴定抗原，用于血清学鉴定)。 　 5．1 血清学鉴定用的抗体制剂 ? 　 1、乙型肝炎病毒表面抗原(HbsAg)的反向被动血凝诊断制剂 ? 主要用于病原菌和血型鉴定（凝集反应） 2、妊辰诊断制剂 ???? 凝集反应 3、抗ABO血型系统血清制剂 第一节 概述 1．抗体 ??????? 能与相应抗原特异性结 合的具有免疫功能的球蛋白。 ? 2．抗体产生过程 3．抗体--丙种球蛋白 第三章 抗体制药 ?1937年 Tiselius用电泳法将血清蛋白 ? 白蛋白 ?甲种（?）球蛋白 乙种（?）球蛋白 丙种（?）球蛋白 ? 并证明抗体活性主要存在于丙种球蛋白组分中（泳动速度最快）。 丙种球蛋白--抗体 ? 4．Ig 20世纪60年代 ???? 多发性骨髓瘤:浆细胞癌变形成的恶性增殖性疾病。 ????? 浆细胞 多发性骨髓瘤 癌变 研究发现病人血清中含有同抗体分子结构类似的球蛋白，统称为免疫球蛋白(Im