AS-PCR检测TLR9基因SNP方法的建立及应用.pdfVIP

现代榆验医学杂志 第 29卷 第 2期 2014年3月 JModLabMed，Vo1．29，No．2，Mar．2014 13 AS—PCR检测 TLR9基因SNP方法的建立及应用 舒 颖 ，魏新素。，童永清 ，张平安 (1．武汉大学人 民医院检验科 ，武汉 430060； 2．新疆生产建设兵团第一师医院呼吸血液科 ，新疆阿克苏 843000) 摘 要 ：目的 建立一种快速检测 Toll样受体 9(tolllikereceptor9，TIR9)基 因 rs187084和 rs352140单核苷酸 多态性 (singlenucleotidepolymorphism，SNP)的方法 ，以及应 用该方 法检测湖北地 区汉族人群各基 因型的分布情况 。方法 根据 TIR9基因rsl87084和 rs352140SNP中碱基变异频率分别设计野生型、突变型以及 内参引物，建立等位基因特异性聚合 酶链反应 (allelespecificPCR，AS-PCR)检测 135例体检人群外周血基 因组 DNA，以DNA测序法检测结果作为参照标准 ， 并统计分析不 同基 因型在人群 中的分布。结果 135例样本 sNP位点均 出现相应的野生型、突变型或者杂合子个体，As_ PCR的检测结果与DNA 测序符合率为 100 。湖北地 区体检人群 TIR9基 因rsl87084位 点基 因型为 ：CC型 占8．14 (11／135)，TT型 占41．48 (56／135)，CT型 占5O．37 (68／135)。cc型所 占比例最 小 (y一82．21，Po．05)，CT 型比例 略高于TT型 ，差异无统计学意义 ( 一2．15，P0．05)。TLR9基 因rs352140位点基 因型为 ：CC型 占41．48 (56／135)， TT型 占l1．11 (15135)，CT型 占47．41 (64／135)。TT基 因型所 占比例最小(y一46．07，P0．05)，CT型略高于CC 型，差异无统计学意义(y一0．96，P0．05)。结论 AS—PCR是一种简单、快速、可靠 以及低成本检测TLR9基 因SNP的 方 法 。 关键词 ：等位基因特异性 PCR；Toll样受体 9基因；单核苷酸多态性 中图分类号：Q503 文献标志码 ：A 文章编号2014)02—013—05 doi：1O．3969／i．issn．1671—7414．2014．02．004 EstablishmentandApplicationofAS—PCR forDetectingSNPsofTLR9 SHU Ying 。W EN Xin—su 。T()NG Yong—qing ‘。ZHANG Ping—an (1．DepartmentofClinicalLaboratory，RenminHospitalofWuhanUniversity，Wuhan 430060，China；2．DepartmentofHematology， ProductionandConstructionCorpsHospitalofXinjiang，XinjiangAksu843000，China) Abstract：Objective Toestablisharapidmethodfordetectingrs187084andrs352140polymorphismsoftolllikereceptor9 (TIR9)gene，andthentodetectthedistributionofgenotypesofhealthypopulationin Hubeibythismethod．Methods W ildtype，nmtantandinternalstandardprimersweredesignedforrsl87084andrs352140polymorphism sofTIR9accord— ingtothemutationfrequencyofbases．135caseshealthypopulation’speripheralbloodgenomicDNA weredetectedbyallele specificPCR(As_P(R)．FheresultsofDNA sequencingweresetasreference