鸭IFNα成熟片段基因的原核表达及抗细胞培养中鸭瘟强毒研究.pdfVIP

中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十二次学术研讨会 对不如皮肤细胞¨q。本试验中3个pcDNA．SDIFN-口剂量组对DP弱毒疫苗免疫鸭外周血T 淋巴细胞的转化功能均显著增强．CD3’淋巴细胞数量显著增多．但不同剂量组对鸭外周血 cDfT淋巴细胞数量影响差异不显著。本研究证明基因枪免疫法是一种高效免疫方法，以免 疫l雌腮的效果最好，3“∥只次之．6吲只再次之。 动物的年龄对基因疫苗的表达有一定影响口”，且雏鸭出生后1以8日龄是细胞免疫水平 迅速提高的阶段【26胡l，为了防止其自身细胞免疫系统的发育水平超越并掩盖了 pcDNA．sDIFN咀免疫对细胞免疫调节作用的观察，因此本试验选择了28日龄鸭进行免疫。 基因疫苗进入动物体后需要一段时间才能表达出蛋白质发挥作用，如ch甜e喈00n等”’给小 d是蛋白表达水平最高的时段：与给鸭直接 鼠免疫表达HIv．19p160蛋白的pc卧Ⅳ质粒后5~6 验采用在基因枪免疫pcDNA．SDIFN．a后15d免疫DP弱毒疫苗，结果pcDNA—sDIFN吨能显 著提高机体的细胞免疫水平。 参考文献略 鸭IFN．Ⅱ成熟片段基因的原核表达及抗细胞培养中 鸭瘟强毒研究 龚永强1。程安春“，汪铭书L2．扬梅1．张瑶2，陈斌‘j (1四川农业大学动物科技学院禽病防治研究中心．四川雅安，625000；2动物疲病与人类健康四川省重 点实验室，四川雅安，625000：3四川省兽医防疫总站，四川成都，610041) 栽体．测序鉴定后将其连接到原核表达栽体p邮2a+，转化宿主茼BL2l(DE3)．经IPTG诱导后获得高效 表达．表迭的重组蛋白分子量大小约37KD．以包涵体形式存在，占茵体总蛋白的30％．利用镍金属垫合 介质填料对表达产物进行纯化．经过良睦后加入长成单屡的鸭胚成纤维细胞(DEF)作用18h．接种100PFu 的数量变化．结果：在DPv感染后15h内，重组鸭IFN吨抗DPv组的病毒核酸拷贝数与不加鸭IFN吨的 阳性对照组之间差异不显著(P0．05)：从23h开始鸭IF№保护组的核酸拷贝数低于阳性对照组并在感 保护组在55h时能减少璃毒10。牡个核酸拷贝敷，相对抑制率为80％．表明重组鸭IFN吨能明显抑制对数 期的DPv复制．具有进一步临床应用的潜力． 关键词鸭lFN吨成熟基因；原核表达；稀释复性：抗DPv强毒 干扰素(Inte哦rion，IFN)是在特定的诱导剂作用下由细胞产生的一种具有高度生物学 活性的糖蛋白，当作用于其他细胞时．能使其它细胞迅速获得抗病毒和抗肿瘤等多方面的功 宿主诱导2．5A合成酶、dsRNA依赖的蛋白激酶(PKR)等激活一系列的酶反应而降解病毒 RNA，从而发挥广谱的抗病毒功能．但这种抗病毒作用却有种属特异性”J。我国是世界上养 鸭数量最多的国家，随着集约化养鸭的发展，许多病毒性疾病(如鸭瘟)仍然严重危害着养 鸭业，研究开发安全有效的鸭的广谱抗病毒药物有重要的科学意义和经济意义。目前对鸭 IFN．a研究相对较少，但IFN家族对本属动物却具有相似的生物学功能。对人IFN—a的研究 I类分子的 表明¨]，IFN．q除具有抗病毒活性外。还具有提高巨噬细胞活性、增强人类MHC 表达、调节B细胞活性、提高自然杀伤细胞活性和诱导单核细胞产生IL·l等免疫调节作用； GuO等”1利用 诱导IgG2a和IgA的含量并选择性增强人流感疫苗的免疫效果；Hui-chen ’为通讯作者 禽娄传染病 DNA疫苗的效果。这揭示出IFN-q作为佐剂使用的良好前景。 pcDNA3．1ⅥlNm增强了FMD 本文对鸭IFN吨成熟片段基因进行克隆、原核表达及其表达产物抗鸭瘟病毒(DPV)的活性 进行了初步研究，为重组鸭IFN．口抗病毒的进一步研究和临床应用提供有用的实验数据。 l材料和方法 1．1实验材料 I和占硎HI位点间插入鸭IFN-a完整ORF的 pBv220．DuIFN吨为在pBv220的E∞R