鸭病毒性肠炎病毒CH强毒株致鸭胚成纤维细胞发生细胞凋亡作用的研究.pdfVIP

第六次全国会员代表大会暨第11次学术研讨会 向细胞空泡出芽释放的方式获得病毒的最终囊膜，细胞通过胞吐作用将空泡及其内部的病毒颗粒释放到细 胞外，或在空泡破裂时将所含的病毒颗粒释放到细胞外。由于细胞核膜间隙内的DEV核农壳具有囊膜结 构而内质网池中的DEV核衣壳无囊膜结构。所以通过向核膜内层出芽释放获得囊膜结构的DEV核衣壳在 内质网池中必定还有一个脱囊膜的过程。 参考文献略 鸭病毒性肠炎病毒CH强毒株致鸭胚成纤维细胞发生细胞 凋亡作用的研究 郭宇飞，程安春，汪铭书，贾仁勇，文明 (动物疫病与人类健康四川省重点实验室，‘四川农业大学动物科技学院禽病防治研究中心，四川 雅安 625014) 摘要：分别通过苏木素一伊红(H．E．)染色镜检法、脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记 (TUNEL)法、DNA梯带(DNALadder)检测法，电子显微镜观察法对鸭病毒性肠炎病毒CH强毒株 具有致DEF细胞融合作用而可形成含十多个细胞核的DEF多核巨细胞。 关键词：鸭病毒性肠炎病毒；鸭胚成纤维细胞；细胞凋亡；包涵体；多核巨细胞 1材料方法 VersaDoeModel 凝胶成像系统(Bio．Rad 酚(上海华舜生物工程有限公司，pH8．0)；100 北京天为时代科技有限公司产品)； bpDNALadder( Proteinase K(Merck公司产品)；琼脂糖( Biowest公司，Regular)。 镜检的方法对鸭胚成纤维细胞(DEF)发生凋亡的情况进行判断；取出现75％左右细胞病变时的细胞培养 电镜观察。上述4种方法各取相应的未接毒DEF细胞作为对照，进行相同的处理。同时利用HE．染色检 内形成包涵体的情况进行观察研究． 1．3飞片的制作：将盖破片用铭酸浸泡处理并清洗干净后平放于细胞瓶底；按常规方法进行DEF培 养和DEV-CHv病毒接种操作。 1．4TUNEL法检测DEV-CHv致DEF细胞凋亡作用； 1． 将飞片从细胞培养瓶中取出，PBS清洗3次，用4％多聚甲醛固定3h。 2．用PBS洗飞片3次．每次5min。 3． rain。 。 加3％H202(用甲醇现配)进行封闭，室温下作用10 4．用PBS洗飞片3次，每次5rain。 5． 用0．1％Triton min。 X一100冰上孵育2 6．用PBS洗飞片3次，每次5min． 家禽传染病 7． 加TUNEL反应液，37℃湿盒中作用60min。 8．用PBS洗飞片3次，每次5rain。 9． min。 加3％BSA进行封闭，37℃湿盒中作用60 min。 10．擦干样品周围，加Converter-POD，37℃湿盒中作用60 11．用PBS洗飞片3次，每次5min。 min。 12．DAB显色，室温下作用10 13．苏术素染色，用水冲洗。 14．盐酸酒精分化，用水冲洗。 15．80％、90％、100％(I)、100％(II)乙醇中脱水。 16．二甲苯透明。 17．光学树脂胶封片，37℃烘片，镜检。 1．5DNA梯带法检测DEV-CHv致DEF细胞凋亡(参考文献川进行) l_ 将细胞从瓶底刮下，细胞悬液以5000