鸭病毒性肠炎病毒强毒在人工感染鸭体内形态结构和发生学的电镜观察.pdfVIP

中国畜牧兽医学会动物微生态学分会第三届第七次学术研讨会论文集(2004年) 鸭病毒性肠炎病毒强毒在人工感染鸭体内形态结构和发生学的电镜观察 袁桂萍，程安春’汪铭书，周毅，刘菲，郭宇飞，韩晓英， 廖永洪，徐超，周伟光，文明，贾仁勇，陈孝跃 (动物疫病与人类健康四川省重点实验室，四川农业大学动物科技学院禽病防治研究 中≈，四川，雅安，6250i4) Enteritis 为研究鸭病毒性肠炎病毒(Duck Virus，DEV)CH强毒株在感染鸭体内的分布 和形态学发生规律．我们应用透射电镜和超薄切片技术对人工感染DEV的成年鸭各组织器 官进行观察。结果表明：感染后12h在脾脏和法氏囊首先观察到少量的DEV颗粒，24h后 在脾、胸腺和法氏囊以及死亡鸭的肝、肠和胰组织器官中均观察到具有典型的疱疹病毒粒 子及其核衣壳形态的DEV。DEV病毒核衣壳有空心型、致密核心型、双环型和内壁附有颗 粒型四种形态，存在胞核和胞浆两种装配方式。病毒成熟有可能有两种方式：一为细胞核 内核衣壳在核内获得皮层，通过核内膜获得囊膜成为成熟病毒；二为核内核衣壳通过内外 核膜进入胞浆，核内和胞浆内自々核衣壳在细胞浆中获得皮层，然后在各种质膜上获得囊膜， 最后成熟病毒释放到细胞外。伴随着病毒的复制、装配和成熟，细胞中出现多种核内和胞 浆包涵体、核内致密颗粒、核内微管和中空短管、胞浆电子致密小体等病毒相关结构。 关键词：鸭病毒性肠炎病毒强毒，人工感染，病毒形态发生 Viral 鸭病毒性肠炎(DuckEnteritis，DVE)，俗称鸭瘟(Duck Plague，DP)，是常见于鸭、 鹅、雁及其它雁形目禽类的一种急性败血性疱疹病毒感染，其造成的死亡、淘汰和产蛋 下降给养鸭业带来巨大的经济损失n“。应用电镜技术对DEV的形态发生学Bt^67引研究已 有零星报道，但多限于对弱毒的细胞培养和自然发病病例的研究，缺乏系统性的人工感 染强毒病例的病毒形态发生学的研究。本研究通过人工感染DEV强毒复制DVE急性病 例，对病毒的形态结构和病毒形态发生学以及在体内的分布情况进行研究。 1材料与方法 1．1鸭 健康2月龄北京鸭50只，未免疫接种，源于雅安无鸭病毒性肠炎感染史地区。 1．2DEV 为cH株强毒，对2-3月龄鸭最小致死量为10’8／m1．由四川农业大学禽病研究中心提供。 1．3人工感染 皮下接种DEVCH株强毒，104最小致死量，只，接种后2、4、6、12、24h翮杀取样， 以后每隔24h取样，2只／次，直至有鸭发生死亡时停止剖杀而采集死亡鸭组织器官．取 燕一鬻一塑～ 料妃掷 瓷一瓣髫～ 娜p一嚣㈨ 中国畜牧兽医学会动物微生态学分会第三届第七次学术研讨会论文集(2004年) 其典型病变部位，观察记录发病及死亡情况。采集的样品包括：心肌、肝脏、肾脏、脾 脏、胸腺、法氏囊、胰腺、大脑、十二指肠。采取正常鸭组织作对照。 1．4超薄切片制备及电镜观察 参照文献【9】制作超薄切片。将采集的样品切成1×1×2mm大小．用3％戊二醛(pH7·2) 和1％锇酸先后固定、包埋、切片，醋酸铀和柠檬酸铅染色，H-600型透射电镜观察并照相。 2结果 2．1病毒攻击的靶器官和靶细胞 鸭感染12h后在脾脏和法氏囊首先观察到少量的病毒出现，24h后胸腺也开始出现病 毒，病毒的数量逐渐增加，在死亡鸭的肝脏、脾脏、十二指肠、法氏囊、胸腺发现数量 极多的病毒存在，胰腺中仅发现少量细胞中有病毒的存在，其它组织没有观察到病毒。 受到感染的细胞主要有网状内皮细胞、巨噬细胞、淋巴细胞、肠上皮细胞、肠道平滑肌 细胞、纤维细胞、’肝细胞、血管内皮细胞，其它如胰腺外分泌细胞、白细胞、浆细胞、 外周血淋巴细胞中偶尔见到病毒的存在。淋巴细胞中成熟病毒较少．往往在病毒成熟之 前凋亡或坏死。而在网状内皮细胞、巨噬细胞、肠上皮细胞、肠道平滑肌细胞、纤维细 胞、肝细胞、血管内皮细胞常可见大量成熟病毒．在血管中偶尔可见游离的成熟病毒。 对照鸭组织中未发现病毒。 2．2．病毒的形态特征 病毒核衣壳直径为42．94nm，多为90nto左右．细胞核和细胞浆中都可见许多的核衣 壳。在感染的宿主细胞内DEV有四种类型的核衣壳：①中空型，核衣壳的中心为电子透明 的空腔．为未