荧光染色及紫外照射UV对黄牛孤雌和克隆胚胎体外发育的影响.pdfVIP

第-t-二届全国动物繁殖学术讨论会论文集 荧光染色及紫外照射(UV)对黄牛孤雌和 克隆胚胎体外发育的影响 韦精卫石德顺’杨素芳韦英明谭世俭孟凡丽 (广西大学动物繁殖研究所南宁530005) 摘要本研究探讨7荧光染色及紫外照射对黄牛孤雌和克隆胚体外发育的影响。结果表明10， 0 01)．表明uv照射黄牛卵母细胞时间大于20S可显著降低孤雌激活胚的卵裂和体外发育潜力； 32倍uv照射组无显著差异，但囊胚率间差异显著(P001)。以1倍Uv强度照射组的分裂率与 照射组原核形成也显著滞后于其它处理组。研究表明降低Uv照射强度可提高胚胎孤雌发育率；比 较以1、1／8倍Uv照射强度引导去核胞质构建的重组胚体外发育情况，结果表明：以1倍uv照射强 Uv照射强度引导去核胞质组(P0．01)， 度引导去核胞质重组胚的卵裂率及囊胚率极显著低于1／8 1／8倍uv照射强度可引导去核操作。 关键词：黄牛；颗粒细胞；血清饥饿；核移植 至目前为止。体细胞克隆已经获得绵羊 胚胎早期死亡，从而影响重组胚的进一步发育， (Wilmut eta1．， 降低核移植效率。目前绝大多数核移植研究仍 etal．。1997)、小鼠(Wakayama et et 1998)、奶牛(Galli 采用荧光引导去核法去核，一般以Hcechst染色 a1．，1999)、山羊(Baguisi a1．，2000)、兔(Chesne后，通过紫外线(Uv)照射确定卵母细胞MII染 a1．。1999)、猪(PoMaevaet et et et 色体的位置，再通过显微操作去核，确实去核完 a1．，2002)、骡(Woods a1．，2002)、猫(Shin et a1．，2003)、马(C搿lieta1．，2003)及大鼠(Zhou全的卵母细胞才可用作核移植的受体胞质。在 显微操作中，由于Hoechst染色和uv照射的使 a1．．2003)后代．据发表资料来看，对于已获得成 功的体细胞克隆动物，其总体效率仍然较低。对 用，可能会对卵母细胞产生损伤作用，影响重组 于目前体细胞核移植效率低下的问题，研究人员 胚的进一步发育。但在适量的Uv照射下即可 认为原因是多方面的，如受体胞质，供体细胞类 达到完全去核，又对重组胚的发育不产生有害 型及细胞周期，供体细胞的遗传背景，核移植程 影响。因此，控制Uv照射强度对核移植胚胎 序以及体外培养系统等。其中受体胞质的准备 的发育至关重要。本研究比较了不同浓度 是体细胞核移植程序中的关键步骤。如果受体 Hoechst对孤雌激活卵母细胞发育的影响，同时 卵母细胞未去核或去核不完全．则可能导致重组 探讨不同UV照射强度对孤雌激活卵母细胞发 胚为多倍体或非整倍体，卵裂异常，发育受阻和 育及其早期原核形成情况和体细胞核移植胚体 一134— 第十二届全国动物繁殖学术讨论会论文集 外发育的影响，以期获得理想的可用于卵母细 荧光染色和UV照射后的各试验组卵母细 胞去核的Hoechst浓度和uV照射强度。 胞在含5血4Ion的培养液内激活5min，之后用 1材料和方法 培养液洗3次，再移入含2mM6一DMAP培养 1．I试剂及培养液的配制 液内培养4h。激活后的卵母细胞用培养液洗3 本实