bFGF对小鼠ES细胞生长增殖的影响.pdfVIP

单核细胞胞质内可见有线粒体、核糖体。胡子鲇的有粒白细胞，根据胞质内颗粒形态及电 子密度不同，将其分为I型颗粒细胞(呈圆形或卵嘲形中等电子密度颗粒)、II型颗粒细 胞(呈棒状低等电子密度颗粒)、Ⅲ型颗粒细胞(空泡状颗粒)三种类型。其中头肾中的 I型粒细胞类似于肥大细胞。 胡子鲇的血细胞生理指标值结果：红细胞数为425．87±54．92(i04／m3)、白细胞数 为0．83±0．26(10’／m3)、红细胞脆性为0．62±0．06。白细胞分类计数值，其中淋巴细胞 X2．19)。并对其生理指标进行统计分析，对总体正常值范围进行估计。 本实验所提供的胡子鲇血细胞的发生和各类斑细胞的形态结构以及血液生理指标的 研究结果。有助于进一步充实和丰富硬骨鱼类血液学的内容。为探索疫病发生的机理，鱼 类疾病的纺治提供基础资料和数据。 关键词：胡子鲇头肾血细胞形态学生理指标 作者简介：陈剑杰(1976一)，男，山西祁县人，硕士，主要从事组织胚胎与细胞生物学方面的研究· bFGF对小鼠ES细胞生长增殖的影响 程树军黄锦桃李海标 (中山大学基础医学院组织胚胎学教研室广东广州510080) 摘要：【目的l探讨碱性成歼堆细胞生长因子(bFGF)对Es细胞生长增殖的影响，为建 立稳定的小鼠ES细胞培养和扩．Il技术打下基础．I方法】将E14小鼠胚胎干细胞分剐培养于 3种浓度的bF(3F的 小鼠成纤堆细胞饲养屡；舍I腰t06叽和舍5ng／mL、10ng，mL、20ng／mL ￡S知飑基础培养液中。观察细胞形态和计数来分化ES细胞克隆敷．【姑果】ES细胞培养液 bFGF可明显抑制ES细胞的分化，细胞形态争Es细胞克I量数与培养于含LIF 中添加10n咖L 的ES细胞培养注中相似，姐化采色呈AKP和SSEA-1阳性。【结论】bFGF可促进小鼠ES 细胞的生长和增殖并可抑稍其分化． 关键词：Es细胞bFGF ．188- 小鼠胚胎成纤维细胞(MEFs)饲养层和小鼠白血病抑制因子(LIF)是培养ES细胞的 最常用方法“1’，但实践中发现，新鲜饲养层的制备繁锁耗时，冻存的MEFs复苏效果和活 力均欠佳，而长期依赖LIF培养细胞不仅成本高，而且细胞易分化。因此建立一套可靠、 稳定、简便的ES细胞培养、扩增技术，是ES细胞研究的前提和基础。过往的研究 表明碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)是～种强有丝分裂促进因子，能促进来源于中胚层和 神经外胚层细胞生长，但它能否促进胚胎千细胞生长，能否替代LIF用于ES细胞培养还 不清楚，为此，本文探讨了不同浓度的bFGF对ES细胞生长的影响。 】材料和方法 1．1 E14小鼠胚胎干细胞 由中山大学附属二院黄绍良教授提供。昆明孕小鼠购自中山大学实验动物中心。 L2培养用试剂 为GIBCOBRL公司产品，丝裂霉素C为日本协和发酵工业株式会社产品。胎牛血清、新生 牛血清购自杭州四季青公司。小鼠抗人胚胎阶段特异性抗原1(Stage specificembryonic antigen，SSEA-I)单克隆抗体购自SIGI雌公司。 1．3培养液 ES细胞基础培养液：80％D卿基础培养液，20％胎牛血清，1mmol／LL-谷氮酰胺、 0．1rmol／L B一疏基乙醇，IOOU／mL青霉素，lOOug／mL链霉素。 小鼠胚胎成纤维细胞饲养层培养液：85％删硪基础培养液，15％新生牛血清，IOOU／mL 青霉素，100ug／mL链霉素。 Es细胞培养液I：饲养层，添加ES细胞基础培养液 LIF ES细胞培养渡Ⅱ：Es细胞基础培养液，添加1000U／ml ES细胞培养液Ⅲ：Es细胞基础培养液，添加5ng／mlbFGF ES细胞培养液Ⅳ：Es细胞基础培养液，添加10ng／mlbFGF ES细胞培养液V：ES细胞基础培养液，添加20ng／mlbF6F 1．4小鼠胚胎成纤维细胞饲养层的制备(此Fs) 取12—13天龄的孕昆明小鼠胚胎，按文献制备饲养层…，第5代以前的}