融合表达淋巴细胞脉络丛脑膜炎病毒和卵清白蛋白CD8ltgtT细胞表位的减毒鼠伤寒沙门氏菌的构建与鉴定.pdfVIP

‘1 94‘Proceedingso{Symposium VoterinaryMieroorganismAss(oiationof Branch,C～hinese Micr—oor—gan—ism—s PCRandrestriction enzymeanalysis shuttle plasmids． 轧 一 柚 ～ m蛐m 盹 {鲁 h【3 @ 脚{|帅畦 m讲豁裟 ∞ 融合表达淋巴细胞脉络丛脑膜炎病毒和卵清白蛋白 CD8+T细胞表位的减毒鼠伤寒沙门氏菌的构建与鉴定 王 rdLoMan2，Claude 芳‘，焦新安¨1，潘志明1，张晓明1，黄金林1．Richa Leclerc2，刘秀梵 (1扬州大学，江苏扬州225009；2法国巴斯德研究所．巴黎75724) [摘 要] 依据淋巴细胞脉络丛脑膜炎病毒(LCMV)主要保护性抗原CD8+T细胞表位 编码LCMV和OVACD8+T细胞表位的寡核苷酸片段，经退火后，克隆入绿色荧光蛋白表达质粒 pYAGFP，经PCR扩增和序列测定分析，证实成功构建T细胞表位与绿色荧光蛋白融合表达的重 组质粒pYAGFPL—O，将此重组质粒pYAGFPLO转化减毒鼠伤寒沙门氏菌X4550，获得重 OVA 源抗原的T细胞应答规律及调控机理打下了重要基础。 [关键词]绿色荧光蛋白；淋巴细胞脉络丛脑膜炎病毒；卵清白蛋白；T细胞表位；减毒鼠伤寒沙门 氏菌 鼠伤寒沙门氏菌是一群泛嗜性的沙门氏菌，它具有广泛感染的宿主谱，能引起人和各种动物的沙门氏菌 病。目前研究表明，减毒沙门氏菌是预防该病的理想话疫苗，它可以引起机体产生长期有效的保护性免疫应 答。另一方面，减毒沙门氏菌是优良的细菌疫苗载体之一，当前已经构建出许多对小鼠乃至人类有保护作用 的减毒鼠伤寒沙门氏菌菌株口～…。沙门氏菌作为载体不仅可以刺激产生针对菌株本身有效的免疫应答，而且 还可以产生针对携带的外源抗原的特异性免疫反应，这些外源抗原包括细菌、病毒、寄生虫等的保护性抗原。 然而，减毒沙门氏菌运送外源抗原产生免疫应答的机理还不尽清楚，尤其是诱导对T细胞表位的应答机理 尚未阐明，要阐明这些机理，则需要优良的研究模型。 系统中研究较少。另一方面，淋巴细胞脉络丛脑膜炎病毒是一种人兽共患病原，其保护性抗原NPCD8+T细 胞表位亦已阐明，但其体内免疫应答规律有待揭示。为此，本研究通过基因重组技术，将编码OVA和LCIVlV 的CD8。T细胞表位的基因片段克隆人减毒鼠伤寒沙门氏菌中，使它们在其中表达，为进一步研究减毒鼠伤 寒沙门氏菌诱导的CD8+T细胞应答规律及调控机理研究奠定基础。 1材料和方法 1．1 Curtiss博士”o 菌株和质粒 大肠杆菌X6212、沙门氏菌X3730、减毒鼠伤寒沙门氏菌X4550均由Roy E0104)的资助。 。基金项目：863计划(2002AA245051)．国家基金和中法先进研究计划(fRA 作者简介：王芳(1972)，女，新疆伊梨人，博士，主要从事免疫学研究工作。 **通讯作者(xajiao@yahoo．(orn) 里粤塑生塑堂垒量堕垡生塑童业委员会2003年学术年会 ·195· 惠赠，表达绿色荧光蛋白的X4550(pYAGFP)由本室…构建。 1·2 寡核苷酸片段两端均为Nco I酶切位点的编码OVA和LCMV CD8一T细胞表位的核苷酸片段的 合成在法国巴斯德研究所完成，寡核甘酸片段的序列为： 1．3 PCR引物用于验证正向