一种新型石蜡切片脱蜡抗原修复液在免疫组化中的应用.docVIP

精品论文 参考文献 一种新型石蜡切片脱蜡抗原修复液在免疫组化中的应用 廖其军（成都市温江区人民医院 四川成都 610000） 【中图分类号】R737.9 【文献标识码】A 【文章编号】1672-5085 (2010)18-0036-02 【摘要】 目的 将新型的石蜡切片脱蜡抗原修复液对免疫组化染色结果的影响。方法 用适量的20倍稀释的脱蜡抗原修复液对乳腺癌组织石蜡切片标本E R 、P R 、CerbB一2表达进行检测。结果 E R 、P R 、CerbB一2阳性定位准确。结论 使用新型的石蜡切片脱蜡抗原修复液替代传统的免疫组化操作，将组织切片脱蜡和抗原修复一次性完成。且操作简便，避免二甲苯对人体所造成的伤害，对染色结果能获得满意的效果。 【关键词】 免疫组化 抗原修复 染色 目前在免疫组化实验中，抗原修复是影响染色结果的最关键因素，抗原修复方法有多种，但经过多年实验室的实验验证大多数实验室采用的是酶消化法与加热抗原修复两种方法。加热抗原修复主要有三种，包括微波、水浴、高压加热等抗原修复方法，其中高压加热抗原修复的方法被越来越多的实验室所采用。在加热抗原修复中使用的缓冲液有多种，如柠檬酸盐缓冲液，Tris，EDTA等，目前首选的为柠檬酸盐缓冲液，优点是染色背景清晰，适合大多数抗体[1]。但不论用哪种缓冲液进行抗原修复都必需对组织切片进行脱蜡水化后才能进行。传统中的免疫组化操作是把烤蜡后的切片用2－3次二甲苯进行脱蜡再逐级经剃度酒精直至水化，再进行相应的抗原修复，这些步骤需要耗时60－100分钟，且有机溶剂二甲苯具有较强的毒性，可能会给实验人员健康带来负面影响。本科室采用新型的石蜡切片脱蜡抗原修复液可以使组织切片脱蜡和抗原修复一次性完成。 l 材料与方法 l.1材料：组织切片来自福建省级机关医院病理室己经用传统的柠檬酸缓冲液进行高压加热抗原修复检测过E R、P R、CerbB-2的乳腺癌组织，20倍稀释的脱蜡抗原修复液，即用型ER、PR、CerbB-2抗体，即用型非生物素Elivilion plus广谱试剂盒，DAB试剂盒，pH 7.4 0.01M PBS缓冲液(以上试剂均来自福州迈新公司）。 l.2方法：将适量的脱蜡抗原修复液按1：20的比例稀释，于高压锅中，液体的量必须能足够浸没整张切片，将己在60℃烤箱烤过2小时左右的组织切片放入锅内，盖上锅盖，扣上压力阀，置1500W电炉上加热至喷气后开始计时1.5分钟，将压力锅离开热源，稍置数分钟，用自来水冲淋数分钟，开盖在室温放置20分钟自然冷却，取出染色架，并采用如下方式充分洗涤：盛1500ml以上的自来水于适当容器中，将染色架置于水中，用手左右摇摆染色架洗涤十来次后，换新水第二次洗涤，共洗涤3－5次，最后在自来水下冲洗片刻，使脱蜡修复液完全洗净。取出组织切片用PBS缓冲液冲洗3times;3分钟，滴加一抗放于湿盒中室温下孵育l小时左右，PBS冲洗3times;3分钟，滴加聚合物增强剂（试剂A），在湿盒中室温孵育20分钟，PBS冲洗3times;3分钟。滴加酶标羊抗鼠/兔聚合物（试剂B），在湿盒中室温孵育30分钟，PBS冲洗3times;3分钟，DAB显色5分钟左右，苏木素复染，脱水，中性树脂封片。 2 结果 染色结果显示背景清晰，阳性定位准确，ER、PR染色阳性定位于细胞核，CerbB-2染色阳性定位于细胞膜，无非特异性染色。 3 讨论 新型石蜡切片脱蜡抗原修复液产品适用于组织石蜡切片的脱蜡和免疫组化染色前的抗原修复，将传统的脱蜡和抗原热修复步骤合二为一，免疫组化染色效果与抗原修复方法密切相关[2]，用该种脱蜡抗原修复液对乳腺癌组织切片进行抗原修复，所检测出的ER、PR、Cerb-2结果与用传统的柠檬酸盐缓冲液进行抗原修复相比无论从强度或范围都几乎一致，而且这种修复液可以省去组织切片脱蜡这一步骤。既节省了时间减轻了劳动强度，又避免了有机溶剂对人体可能造成的伤害。该种脱蜡抗原修复液无毒性，无污染，环保安全，适合大多数抗体的免疫组化实验。 参 考 文 献 [1]王伯沄，李玉松，黄高昇等. 病理学技术[M].北京：人民卫生出版社，2000：370－372. [2]孟奎. 抗原修复技术在免疫组织化学中的作用[J].中国组织化学与细胞化学杂志,2001,(01).