TNFα促进猪骨骼肌成肌细胞凋亡并抑制其增殖分化研究.pdfVIP

农业与林业 505 TNF一亿促进猪骨骼肌成肌细胞凋亡并抑制其增殖分化① 于太永 吴江维 庞卫军 杨公社 西北农林科技大学，陕西省杨凌区，712100 摘 要 本文探讨TNF—a对猪骨骼肌成肌细胞分化的影响，及其可能的作用机制。原 代培养猪骨骼肌成肌细胞，通过倒置显微镜定性观察细胞分化的形态学变化；生肌指数和CK 活性定量分析成肌细胞分化程度；细胞免疫化学法分析MyHC的蛋白表达情况；采用特异性 抑制荆探讨TNF一位可能的作用信号途径。结果显示：在猪骨骼肌成肌细胞分化过程中，外源 性TNF-a减少细胞核融合和肌管形成；浓度依赖性地显著降低生肌指数和CK活性(P 果说明：TNF—a抑制猪骨骼肌成肌细胞分化，并且这种作用可能是通过激活ERK和MAPK 信号转导通路实现的。研究结果暗示TNF-a在猪骨骼肌成肌细胞分化过程中可能具有重要 作用。 关键词 细胞生物学TNF—a成肌细胞增殖分化 一、刖吾 近年来，愈来愈多的研究证实脂肪组织不仅仅是机体能量的主要贮存和释放场所，它还分泌I，ep— 细胞因子和酶类，以旁分泌／自分泌或内分泌方式对包括中枢神经系统在内的其他组织和器官发挥广泛 而重要的调节作用。同样，根据近年的研究结果，国内外有学者认为骨骼肌也不单是运动器官，同时也 是生物体重要的内分泌器官。骨骼肌能表达、合成和分泌多种生物信号分子包括调节肽、细胞因子和生 长因子等，调节骨骼肌的生长、代谢和运动功能；甚至调节机体远隔器官组织的功能。骨骼肌生成和分 泌的活性物质在运动系统疾病和某些全身性疾病的发病中扮演重要角色。 脂肪和骨骼肌所分泌的细胞因子间的相互作用对肌肉形成的速率和程度、肌肉生长、脂肪形成、脂 肪分解和能源物质利用等产生重要影响。TNF—a既可在脂肪细胞中表达和分泌，也可以由骨骼肌细胞 合成和分泌，可能在脂肪细胞和骨骼肌细胞的信息交换与相互作用中起关键作用。TNF-a对脂肪细胞 可产生多种效应，如促进凋亡、抑制前体脂肪细胞分化、削弱胰岛素信号，并可能通过刺激肥胖个体脂肪 细胞甘油三酯水解，产生过量游离脂肪酸，从而加剧糖尿病和心血管疾病的发展。已证明，TNF—a促进 骨骼肌中肌原纤维蛋白的降解，这种作用是通过依赖于遍在蛋白的蛋白酶解系统完成；促使骨骼肌细胞 编程性死亡；激活UCP2和UCP3基因的表达；另外，参与病理状态下胰岛素抗性的产生。 猪作为肥胖程度最高的肉用家畜，加之它的解剖和生理结构与人类最为接近，它已日渐成为研究肥 506 第五届博士生学术年会论文集 胖及相关疾病的理想模型。然而，TNF—a对其骨骼肌成肌细胞增殖分化的影响目前尚不清楚。因此， 本研究通过外源性TNF—a处理猪原代骨骼肌成肌细胞，研究其在体外条件下对骨骼肌成肌细胞增殖分 化的作用及其可能的机制，为阐明脂肪和肌肉间的相互作用，最终实现肉用家畜脂肪和肌肉的含量与分 布的有效调控提供理论依据；同时，也为人类肥胖和肌肉相关疾病的治疗提供借鉴。 二、材料与方法 (一)主要材料 SP600125购自美国Pepro Cruz 公司；MyHC和myogenin抗体购自美国Santa ECI。Plus超敏发光液购自北京普利菜基因技术公司；其余试剂均为国产分 生物技术有限公司；Super 析纯。 (二)主要方法 1．猪骨骼肌成肌细胞的原代培养 采用本实验室已建立的方法。获取的细胞以5×104个／cm2密度接种于6孔培养板，置37℃、5％ CO：饱和湿度的培养箱中培养。 2．生肌指数(Themyogenicindex)的计算 生肌指数一多核细胞数(≥3个核)／观察细胞总数 3．RT—PCR分析 参见本实验室已建立的方法。 4．CK活性测定 处理2次，每次30s。最后，用Aul000一全自动生化分析仪测定CK活性。 5．细胞免疫化学分析MyHC的表达： 骨骼肌成肌细胞在玻片上用生长培养液培养5d，把生长培养液更换为分化培养液，分别以终浓度 描电镜观察，并照相分析。 (三)统计方法