TRAIL的生物学功能及作用机制的研究进展研究.pdfVIP

片子甲; 1. TRAIL的生物学功能及作用机制的研究进展 (王梁华.焦炳华 第二军医大学基拙医学部分予毒理教研室，上海，200433) 1.TRAIL是TNF超家族的新成员 肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体 (tumornecrosisfactorrelated optosis-少ducingligand,TRAIL)(WileySR,etal)或称Apo-2(Apo-2ligand. Apo-2L)(PittiRM,etal)是一个与TNF相关的细胞因子. TRAIL是在EST库中寻找TNF与Fas配体具有序列同源性的分子时发 现的。人TRAIL分子的细胞外区域与Fas/Apo-1/CD95配体、TNF-a.LT-a 和LT-0的同源性分别为28%.23%.23%和22%, 根据TRAIL的cDNA推断的氮基酸序列为: MAMMEVQGGPSLGQ匹丝丝止卫逃创巴戈送丝些塑卫 ELKQMQPKYSKSGIACFLKE DDSTWDPNDEESMNSPCWQV KWQLRQLGRKMILRTSEETISTYQEKQQNISPLVRERCPQ RVAANITCTR CRSNTLSSPNSirNEKAL1ILR NCBLYIBBKTKNOB四叨灯 YKYTSYPDPI LLMKSARNSCWSKDABTCLYSI却CCIFBLKBNDRIFVSY刀VBNLIDMDNEASFFCAFLV ‘ 注:划线者为跨膜区;黑体为109位Asn抢基化位点;抖体为可溶性TRAIL (114-281位)的一种. 对人TRAIL进行重组表达、理化性质分析和诱导多种细胞凋亡的研究， 联系氮墓酸序列分析后发现:人 TRAIL整个分子由281个氮荃酸组成:等电 点为 7.63:根据蛋白质化学理论推导的可溶性分子为第 114-281位氮荃酸， 但在体内还没有发现它被醉从膜上切割下来形成可溶性的分子，氨基酸序列 中似乎也没金属蛋白醉的醉切位点，非还原 SDS分析此可溶性分子， 分子f为 24KD左右，约在48KD处形成二聚体，三聚体大约为66KD:另一 研究小组认为 TRAIL的可溶性分子应为第 ，5-281位氨基酸，这样的可溶性 分子比重组的TNF-。对鼠L929细胞的杀伤绝对浓度低 5-10倍。人 TRAIL 可能的N-精墓化位点在 109位的Asn，但邻近 Pro的存在也许不能有效糖荃 化，鼠的第52位 Asn可能糖基化。TRAIL是典型的II型跨膜蛋白:其N一末 端 (细胞内区域)没有信号肚，第 15-40位氨基酸为琉水区域。可形成跨膜 结构;C一末端 (细胞外区域)与TNF和Fas配体一样。保守性较强，能形成 几个13一折叠结构再形成典型的p一链夹心，即可形成同源三聚体的亚结构， 几个最保守的氨基酸可形成三聚体的中轴 D-链。鼠的TRAIL由291个氨基 酸组成，用杆状病毒一昆虫细胞表达系统表达鼠全分子 TRAIL 的结果显示: 以膜结合的形式表达，裂解细胞后 SDS显示分子量为 32-33KD:人与 鼠的TRAIL有交叉活性(WileySR,etal;MarianiSM,etal;1997). 但是，TRAIL与TNF家族成员还是有所不同:TRAIL的1V一末端 (细胞 内区域)与其它成员无同源性，它的N一末端极短，只有儿个氨基酸 (第 1-14 位)，而且序列较特珠，前 4位中就有 3个 Met，估计不能介导生物功能，而 有些 TNF家族成员的 N一末端本身就能介导一些生物学作用:另外，它的广 谱诱导细胞凋亡作用也只有 Fas配体才能与之相媲美，而其它的成员都有组 织与细胞特异性.这与它和 Fas配体同源性较高相吻合:还有，TRAIL染色 体定位显示在 33qq2266..11-一2.6.2，这与 TNF家族其它成员定位于 6号染色体或 19pl3.3不同，到现在为止.还没有发现3号染色体编码其它TNF家族成员。 2.TRAIL诱导转化系细胞和肿瘤细胞系的凋亡 由于TRAIL具有对突变细胞的选择性作用(GuraT;FrenchLEandTschopp J)和多种受体的存在(GriffithTSandLynchDH;GolsteinP)，吸引T多家实验 室进行深入研究。但 TRAIL的广泛作用和实验条件的不同，使各实验室报道 的结果相差较大，有的甚至还相互矛盾(AshkenaisAandDixiyVM)。但TRAIL 广泛诱导肿瘤细胞和转化系细胞的凋亡作用是非常肯定的，有矛盾的地方就 是