MicroRNA表达载体对大鼠KiSS1基因的干预效应.pdfVIP

Clin 雾屑俐密奎刍第27卷第s2012年4月JApplPediatr．Ii01．27No．8。Apr．2012 ·577· ·论著· DOI：10．3969／j．issn．1003-515X．2012．08．008 MicroRNA表达载体对大鼠KISSl基因的干预效应 董红，李嫔 (上海市儿童医院上海交通大学附属儿童医院内分泌科。上海200040) blot技术观察转染48h及72 染72h后细胞中各载体表达。采用实时荧光定量一PCR(RT-RCR)及Western h后miRNA表达载体对 KISSl基因的干预效应。结果荧光显微镜观察到miRNA载体转染293T细胞后可表达绿色荧光蛋白。免疫荧光结果显示转染 pcDNA3．1(+)．KiSSI载体组可见红色的KISSl蛋白在细胞质中表达；RT．PCR结果显示干预组细胞KISSlmRNA表达显著低于阳 性对照组和阴性对照组(只(0．05)。其中p-KISSl一miRNA2组KISSl基因表达抑制最显著。降低了85％；Westernblot结果显示P— 效应。其中针对KiSSImRNA序列304—324 依据。 实用儿科临床杂志．2012．2713)：577—5鼬 关键词：KiSSl；micrnRNA；真核表达栽体；人胚肾细胞株293T 中图分类号：R725．8 文献标识码：A 文章编号：1003—515X(2012)08—0577—04 Intervention VectorsonRat EffectsofMicroRNA KISSlGene Expression DONG P讯 Hong。n of AffiliatedtO Children’s JiaotongUniversity，sh髓gIlai 200040． (DepartmentEndocrinology，Children’8Hospital Shanghai Hospital，Shaoghsi China) To rat theinterventioneffectsof vectorson in293Tcells． Abstract：Objectiveinvestigate microRNA(miRNA)expressionKISS!gene Methods1he wasconstructedthe ofKiSSI U— by eukaryotieexpressionplasmidpcDNA3．1(+)一KiSSl cloningwhole!tequencegene．By miRNA of anda were wereaimedatthedifferent sing designsoftware，four sequencedesigned．They