RNA干扰ezrin基因真核生物表达载体的构建及鉴定.pdfVIP

生国医药!!!!生!旦筮!鲞筮兰翅￡!i塑丛!尘!i塑：垒P亘!!Q!!：Y!!：!：塑!：垒 ·467· ．论著 RNA干扰ezrin基因真核生物表达载体的 构建及鉴定 杨旭凯王养民张斌周逢海董永超景德善常德辉李卫平 郑少斌 【摘要】 目的构建用于RNA干扰(RNAi)的小发夹RNAshRNA表达载体并检测其对ezrin基因的沉 默效果。方法 以ezrin为靶基因，以pGenesil．1质粒为载体，设计和构建重组体，根据GeneBank数据库提供 的ezrin核苷酸序列，按照Tuschl设计原则，设计2条小发夹结构的DNA序列，经退火形成互补双链，克隆到 空载体pGenesil一1中，转化DHSa菌株，提取质粒，予以酶切和测序鉴定；重组质粒转染786-0肾癌细胞株，运 用实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法进行筛选鉴定。结果酶切及测序鉴定表明成功地构建重组质粒 shRNA—ezrin2 mRNA相对表达量分别为(0．33764-0．0166)及(0．46614-0．0266)，shRNA—ezrinl与shRNA-