PSMAep特异性驱动shRNA靶向干扰前列腺癌LNCap细胞的研究.pdfVIP

2011 年第38 卷第20 期 中国肿瘤临床 1239 · · 基础研究 PSMAe/p 特异性驱动shRNA 靶向干扰前列腺癌 LNCap 细胞的研究* ① ② ② ② ① 王文滪 刘冉录 徐 勇 张志宏 鞠培泉 探讨前列腺特异性膜抗原增强子/启动子（PSMAe/p）驱动短发夹RNA （shRNA）靶向干扰前列腺癌细胞的特异 摘要 目的： 性。 运用RNA 干扰技术，以转铁蛋白-聚乙二醇-聚乙烯亚胺（Tf-PEG-PEI ）作为基因转移载体，以前列腺癌LNCap 细胞为 方法： 研究对象，并以前列腺癌PC-3 细胞、膀胱癌T24 细胞及人胚肾HEK293 细胞做为对照，将外源增强绿色荧光蛋白（EGFP ）基因及 以PSMAe/p 为启动序列靶向EGFP 的干扰质粒转入培养细胞，以实时定量PCR （qRT-PCR ）及Western blot 分别检测EGFP 基因及 蛋白在4 种细胞各组中的表达情况，研究PSMAe/p 驱动shRNA 靶向干扰前列腺癌细胞的特异性。 在前列腺癌LNCap 细胞 结果： 组中，与单独转入EGFP 基因（pEGFP-C 1）的细胞组（A 组）及转入EGFP 基因（pEGFP-C 1）+ 空载体质粒组（pPSMAe/p-UPRT ）（C 组）相比，转入EGFP 基因（pEGFP-C 1）及干扰质粒［pPSMAe/p-shEGFP-poly （A ）］组（B 组），EGFP 基因表达及蛋白表达水平下调， 分别与对照组（A 组、C 组）相比差异具有统计学差异（ P0.05 ），而转入EGFP 基因（pEGFP-C 1）的细胞组（A 组）和转入EGFP 基因 （pEGFP-C 1）+空载体质粒组pPSMAe/p-UPRT ）（C 组）间比较差异无统计学意义（ P0.05 ）；而在前列腺癌PC-3 细胞、膀胱癌T24 细胞及人胚肾HEK293 细胞中EGFP 基因及蛋白表达水平在实验组与对照组、对照组间比较差异无统计学意义（ P0.05 ）。结论： PSMAe/p 驱动shRNA 具有细胞特异性，其可驱动特异基因片段在前列腺癌LNCap 细胞中表达，从而实现基因治疗的细胞特异性， 可作为前列腺癌基因治疗的靶向策略之一。 关键词 前列腺癌 基因治疗 RNA 干扰 细胞特异性 doi:10.3969/j.issn. 1000-8179.2011.20.001 Short-hairpin RNA Transcription Specificity Driven by PSMAe/p Targeting LNCap Cells of Prostate Cancer 1 2 2 2 1 Wenyu WANG , Ra