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实用临床医药杂志
2013年第17卷第3期
JoumalofC1inicalMedicineinPractice
人Hiwi
miRNA干扰质粒的构建及其鉴定
郝 波1，蒋建霞1，施瑞华1，张国新1，成道祥2
(1．南京医科大学第一附属医院消化科，江苏南京，210029；
2．江苏省陆军预备役高射炮兵第一师第一团，江苏南京，210029)
摘要：目的构建人Hiwi基因miRNA干扰质粒，探讨其对肝癌7721细胞株中Hiwi基因和蛋白表达的阻抑作用。方法
根据Homosapjens
Hjwj基因序列，设计RNA干扰靶点，构建4对Hjwi的pcDNAT”6．2．Gw／EmcFPmiRmiRNA及l对无效对
照miRNA干扰质粒并将其转染至肝癌772l细胞中，通过RT—PcR和westemblot检测7721细胞中HiwimRNA和蛋白的表达水
平。结果成功构建了4对HiwimiRNA干扰质粒及无效干扰质粒，测序表明Hiwi干扰序列及读框完全正确。RT—PcR和
westem
blot结果显示，与未转染组及阴性对照组比较，转染该载体能有效下调772l细胞株中mRNA和蛋白的表达。结论成
功构建了Hiwi的干扰表达载体，为进一步探讨Hiwi基因在肝癌中的相关机制提供了实验基础。
关键词：Hiwi基因；miRNA干扰；真核表达质粒；肝癌
中图分类号：R735．7
ConstructionandidentificationofmiRNArecombinant
of
vectorsHiwi
eukaryoticexpression
HAo
B01，JnNGJia腿ial，SmRllihual，
ZHANG
Guoxinl，C明巳NGDaoxian92
(1．孔e
nM￡舶印i￡Ⅱf4历胁￡edfo№彬昭胁dicnf‰i钾珊渺，№彬昭，^on伊u，210029；
Pr捌nciof
2．以彻伊u Ar，砂AⅢ泌ircr妒A疗舭∥mse列e，№研增，^o，拶“，210029)
To the vectorsof
constmctmiRNA
eukaryotic HIWI，and
ABSTARCT：objectiVe expression
its of the and inhuman carcinoma
exploreactivityinhibitinggene proteinexpression Hepatocellular
7721 cell．MethodsFour micminteIferenceRNA Vectors toHiwiand
speci6c expressionspeci6c
one contmlvectorwere andconstmcted．After re—
non—homologousnegative designed identmcation，
striction andDNA were m
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