人类白细胞抗原-G RNA干扰载体的构建及效应检测.pdfVIP

人类白细胞抗原-G RNA干扰载体的构建及效应检测 张彤3 张琪4陈规划3 曾宪成4，陈伟2 李华3聂常富4 [摘要]目的 构建表达人类白细胞抗原-G (HLA-G)基因shRNA载体，探讨其对NK细胞杀伤效应的影响。 方法 构建4个HLA-G-shRNA真核表达质粒，瞬时转染至人肝癌Bel-7402细胞，检测HLA-G mRNA和蛋白水平 的表达。将NK-92MI细胞(效应细胞)与转染后的Bel-7402细胞(靶细胞)共同培养，以LDH释放法观察不同效 靶比时NK-92MI细胞对靶细胞的杀伤效应。结果 经酶切及测序鉴定证实，插入序列与设计的序列相符。RT-PCR 和Western blot结果均表明重组载体抑制了Bel-7402细胞HLA-G基因的表达。NK-92MI细胞对转染HLA-G shRNA的Bel-7402细胞杀伤作用明显增强(P＜0. 01)。封闭NK-92MI细胞KIR2DL4受体后，杀伤作用减弱 (P＜0.01)。结论 成功构建了HLA-G shRNA载体，下调HLA-G可以增强NK细胞对肝癌细胞的杀伤效应， HLA-G与NK细胞表面KIR2DL4受体结合后，向NK细胞传递抑制效应。 人类白细胞抗原-G；RNA干扰；肝癌 R730.5 A Construction of Recombinant Expression Vector Carrying Human Leukocyte Antigen-G-shRNA and Detection of Its Effect ZENG Xian-chengCHEN Wei ZHANG TongLI HuaNIEChang-fuZHANG QiCHEN Gui-hua [基金项目]△国家自然科学基金资助项目(项目编号；广东省科技计划项目重大专项(项目编号：2007A032000001)；广东省自 然科学基金(项目编号：10451130001004472)；增城市创新扶持基金(项目编号：ZC201004) [作者单位]1.增城市人民医院(中山大学附属博济医院)普通外科(广东增城511300)；2.浙江大学医学院附属第二医院普通外科(浙江杭 州310009)：3.中山大学器官移植研究所、中山大学附属第三医院肝移植中心(广东广州510630)；4.郑州大学附属肿瘤医院肝胆外科(河南郑 州450003) [作者简介]曾宪成(1974年-)，男，山东省临朐县人，博士，主治医师，主要从事肝癌的基础与临床研究，E-mail: zxcq12333@163.com。 中国普外基础与临床杂志2012年6月第19卷第6期ChinJBasesClinGeneralSurg，V01．19，No．6．Jun．2012 ofNationalNaturalScienceFoundationof 1 [Foundation items][Foundationitems]TheThe Key Program of National Natural Science Foundation of China (No. ; TheChina(No．3057769)；The KeyProgram ItemPlannedScienceand Natural Key Item Planned Science and Technology Project of Guangdong Province (No. 2007A032000001) ; Guangdong Natural Key TechnologyProjectofGuangdong Science Foundation (No. 10451130001004472) ; Innovation Support Fund of Zengcheng (No. ZC201004)ScienceFoundation(No．10451130001004472)；Innovation 肝脏移植是治疗终末期肝病和肝癌的有效手 段，但术后肿瘤