双黄连对乌头碱所致PC12细胞损伤的干预作用.pdfVIP

· 408 · 中国中西医结合急救杂志 20 14 年11 月第21 卷第6 期 Chin J TCM WM Crit Care ，November 20 14 ，Vol.21，No.6 ·论著 · 双黄连对乌头碱所致PC12 细胞损伤的干预作用 （温州医科大学附属第一医院急诊医学中心，浙江 温州 325000 ） 【摘要】 目的 观察乌头碱对PC12 细胞释放谷氨酸（Glu ）及 γ-氨基丁酸（GABA ）的影响，并探讨双黄 连的干预作用。方法 采用细胞增殖试剂（CCK-8 ）检测乌头碱对PC12 细胞的毒性，建立乌头碱损伤模型，将 处于对数生长期的PC12 细胞按随机数字表法分为空白对照组（加入含0.1% 二甲亚砜的完全培养基）、双黄连 对照组（加入50 μg/mL 的双黄连）、黄芩苷对照组（加入20 μmol/L 的黄芩苷）、乌头碱中毒组（加入 100 μmol/L 的乌头碱）、双黄连干预组（加入 100 μmol/L 的乌头碱和50 μg/mL 的双黄连）、黄芩苷干预组（加入 100 μmol/L 的乌头碱和20 μmol/L 的黄芩苷），各组均培养PC12 细胞24 h 。采用CCK-8 法检测双黄连及黄芩苷干预前 后PC12 细胞吸光度（A ）值的变化；用流式细胞仪检测PC12 细胞凋亡情况；采用化学比色法及酶联免疫吸附 试验（ELISA ）检测细胞培养液中Glu 、GABA 含量的变化。结果 与空白对照组比较，100 μmol/L 乌头碱处理 PC12 细胞24 h 后细胞活性明显降低（A 值：1.003 ±0.042 比1.685 ±0.030 ，P ＜0.05 ），所以本实验将 100 μmol/L 乌头碱与PC12 细胞孵育24 h 作为后续实验的干预浓度。空白对照组的正常PC12 细胞为95.89% ；而乌头 碱中毒组损伤的PC12 细胞达到64.27% ，其中早期凋亡率达45.46% ；双黄连干预组和黄芩苷干预组早期细胞 凋亡率分别降低至33.24% 和28.22%。与空白对照比较，双黄连和黄芩苷单独作用对照组细胞活性及PC12 细胞释放的Glu 和GABA 含量差异均无统计学意义（均P ＞0.05 ）；乌头碱中毒组细胞活性明显降低（A 值： 1.056 ±0.039 比1.722 ±0.083 ），PC12 细胞释放的Glu 和GABA 含量显著升高 〔Glu （μmol/L ）：5.295 ±0.137 比 3.433 ±0.138 ，GABA （μmol/L ）：0.769 ±0.020 比0.528 ±0.0 12 ，均P ＜0.05 〕；与乌头碱中毒组比较，双黄连干预 组和黄芩苷干预组PC12 细胞活性明显增加（1.202 ±0.059 和1.180 ±0.032 ），Glu 含量显著减少（4.055 ±0.086 和3.984 ±0.057 ），GABA 含量显著增加（0.809 ±0.0 16 和0.930 ±0.021），差异均有统计学意义（均P ＜0.05 ），且 双黄连干预组细胞活性增加程度较黄芩苷干预组更显著；双黄连干预组与黄芩苷干预组Glu 和GABA 含量比 较差异无统计学意义（均P ＞0.05 ）。结论 Glu 和GABA 的改变可能是乌头碱所致神经毒性机制之一；双黄连 可能通过其主要成分黄芩苷降低Glu 含量、升高GABA 含量，从而拮抗乌头碱的神经毒性。 【关键词】 乌头碱； 神经损伤； 黄芩苷； 神经递质 The intervention effect of Shuanghuanglian on PC12 cell injury induced by aconitine Wang Lei ， Zhao Guangj u ， Hong Guangl