现代基因工程05怎样获得特定基因的克隆.ppt

基因工程第五讲：怎样获得特定基因的克隆; 基因克隆实验中，成败的关键往往取决于能否设计出一个合适的方案，将目的基因直接或间接地从其他重组体中挑选出来。 一旦解决了这个问题，获得了目的基因的克隆，分子生物学家就能利用多种技术从这个基因中获取各种有用的生物信息。;讲课提纲;5.1 筛选的难题;直接筛选目的基因的方法： 因其快速、清晰的优点受到青睐。 但不能应用于所有的基因。 在当前很多生物的完整基因组文库已经建立的情况下，需要用后一种方法获得目的基因的克隆。;5.2 直接筛选目的基因; 质粒R-5带有4种抗生素的抗性基因：卡那霉素、氯霉素、链霉素和磺胺类药剂。 EcoRI酶切产生的13个片段中，有一个含有卡那霉素抗性基因。 首先将R6-5的EcoRI所有酶切片段插到某个载体上的EcoRI位点(如pBR322)。 连接物中混合有这13个不同重组体的多拷贝，其中一组携带有卡那霉素抗性基因。; 由于pBR322的EcoRI位点既不在氨苄青霉素抗性基因中也不在四环素抗性基因上，似乎不能用插入失活来筛选重组体。 但实际上这并不影响对卡那霉素抗性基因的克隆，因为这个基因本身就可被用作筛选标志。 转化体接种到含卡那霉素的琼脂上，惟一能存活并增殖的就是那些