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中国农学通报 2013,29(18):119-126
Chinese Agricultural Science Bulletin
拟南芥WUS 基因的克隆及植物表达载体的构建与鉴定
1,2 2
毕政鸿 ，李 哲
1
（海南大学农学院，海南儋州571737；
2 中国热带农业科学院橡胶研究所/农业部橡胶树生物学重点开放实验室，海南儋州571737）
摘 要：为了研究AtWUS 基因在橡胶树胚性易碎愈伤组织中的表达对体细胞胚发生的生物学作用，用构
建的根癌农杆菌EHA105（携带pCAMBIA2301-35S-AtWUS ）对橡胶树胚性易碎愈伤组织进行转化。根
据已报道的AtWUS 序列设计特异引物，进行RT-PCR 和序列分析，同时用重叠延伸PCR 技术（gene
splicing by overlap extension PCR ，简称）构建AtWUS-EGFP 融合基因。结果表明：与GenBank 上EGFP
基因和拟南芥AtWUS 序列同源性为100% ，分别构建了pCAMBIA2301-35S-AtWUS （含有GUS 和NPTII
基因）和pER8-AtWUS-EGFP （含有HPTII 基因）载体，采用电击转化法转进根癌农杆菌EHA105 中。最
后，通过GUS 检测法鉴定了pCAMBIA2301-35S-AtWUS 已经整合到橡胶树中。本研究分别成功构建了
组成型植物表达载体pCAMBIA2301-35S-AtWUS 和诱导型植物表达载体pER8-AtWUS-EGFP ，为橡胶
树遗传转化的研究奠定了基础。
关键词：
AtWUS 基因；EGFP基因；融合基因；重叠延伸PCR；橡胶树
中图分类号：S59 文献标志码：A 论文编号：2012-3631
Cloning of Arabidopsis WUS Gene, Construction and Identification of Plant Expression Vectors
Bi Zhenghong1,2, Li Zhe2
1
( CollegeofAgronomy,HainanUniversity, Danzhou Hainan 571737;
2RubberResearchInstitute,CATAS/KeyLaboratoryofRubberBiology,MinistryofAgriculture, Danzhou Hainan 571737)
Abstract: In order to study the effect of expression of AtWUS in embryonic friable calli on embryogenesis,
calli were co-cultivated with the A. tumefaciens strain EHA105 harboring a binary vector
pCAMBIA2301-35S-AtWUS. According to the reported AtWUS gene sequence, a pair of special primers was
designed, being carried out RT- PCR and sequence analysis. At the same time, SOE PCR (gene splicing by
overlap extension PCR) was used to for
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