番茄果实特异性LYC-B干扰载体的构建及在不同颜色果实中的表达特异性验证.pdfVIP

2014 （5）：11-18 中 国 蔬 菜 研究论文 CHINA VEGETABLES 番茄果实特异性LYC-B 干扰载体的构建及 在不同颜色果实中的表达特异性验证 * 王巧丽　梁　燕 　张振才　李　翠　李云洲　王玲慧 （西北农林科技大学园艺学院，陕西杨凌712100） 摘　要：为了研究番茄LYC-B 干扰对类胡萝 卜素合成主要酶和主要代谢产物的影响，构建了果实特异性的番茄红素 β-环 化酶LYC-B 干扰载体，并验证了其在不同颜色番茄果实中的有效性。依据X13437.1扩增番茄果实特异启动子E8，构建了果 实特异性载体E8-pBI121，其在粉色、红色、绿色和紫色的番茄果实中均能表达。依据X86452.1扩增番茄LYC-B 从61～861 bp间长度为801bp的片段LYC-B 1和从480～781bp间长度为302bp的片段LYC-B2，构建了以CaMV35S为启动子的LYC-B 干扰表达载体pBI121-B1B2，以E8替换CaMV35S，构建了果实特异性干扰载体E8-pBI121-B1B2。采用农杆菌注射法分别 侵染番茄叶片和果实，GUS染色显示，pBI121-B1B2在叶片、果实和种子中均表达，E8-pBI121-B1B2只在果实和种子中表达。 关键词：番茄；类胡萝 卜素；E8启动子；CaMV35S启动子；GUS染色 PSY 据统计，至2010年全球番茄产量达 14.1亿t 了 1对类胡萝 卜素合成代谢基因表达和物质积 ô 累的影响 （Fraseretal.，2002，2007；Gadyetal.， （Branth me，2010）。随着人们生活水平的提高， 番茄的营养和保健作用越来越受到重视，其中最 2012；Robertsonetal.，2012；Fantinietal.， 重要的一类功能物质就是类胡萝 卜素 （Fraser ＆ 2013）。番茄红素环化酶分别由LYC-B 、LYC-E Bramley，2004）。 和CYC-B 编码，其中CYC-B 只在花和果实中特 LYC-B LYC-E 番茄类胡萝 卜素合成代谢途径的研究已经较 异 性 表 达 （Dalaletal.，2010）， 和 为明晰 （姜娜娜等，2007；Cazzonelli ＆Pogson， 组成型表达，三者均在果实成熟时下调表达 2010）。在番茄果实类胡萝 卜素代谢中有两个关键 （Peckeretal.，1996；Ronenetal.，1999，2000）。 调控点:一是八氢番茄红素合成酶，作用于牻牛儿 在果实未成熟时，番茄果实中牻牛儿基牻牛儿基焦 基牻牛儿基焦磷酸，启动类胡萝 卜素合成代谢；二 磷酸沿着不同代谢途径合成植醇、赤霉素、类胡萝 PSY 是番茄红素环化酶，作用于番茄红素，启动番茄 卜素和脱落酸等；当果实开始转色时， 1表达 红素降解为含环和含氧的类胡萝 卜素。番茄体内八 水平成倍增加，这时牻牛儿基牻牛儿基焦磷酸主 PSY PSY PSY 要合成类胡萝 卜素 （Giulianoetal.，1993），同时番 氢番茄红素合成酶由 1和 2编码， 1在 PSY 茄红素环化酶基因表达下降，开始积累番茄红素 花和果实中特异性表达， 2本底水平表达 （R