类人胶原蛋白表达载体的构建及在毕赤酵母中的表达.pdfVIP

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2018-04-06 发布于北京
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类人胶原蛋白表达载体的构建及在毕赤酵母中的表达.pdf

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第32卷第2期南京理工大学学报(自然科学版) V01．32No．2 of ofScienceand Journal 2008年4月 NanjingUniversity Technology(NaturalScience) Apr．2008 类人胶原蛋白表达载体的构建及在毕赤酵母中的表达高力虎1，杨树林1，储卫华2，李新柱1，钮小松1，杨艳1 (1．南京理工大学化工学院，江苏南京210094；2．中国药科大学生命科学与技术学院，江苏南京210009) 摘要：基于人胶原蛋白胶原域序列特征，设计合成了一段类人胶原蛋白基因单体gel。采用同向串联方式，构建了含6个单体的类人胶原蛋白表达载体pPIC9KG6，并经DNA测序鉴定。将 pPIC9KG6电转化毕赤酵母(Pichiapastoris)经G418筛选得到多拷贝转化子，通过甲醇诱导表达类人胶原蛋白，SDS．PAGE检测表明：初步表达的类人胶原蛋白为胞外产物，其表观分子量为112ku。关键词：类人胶原蛋白；基因串联；毕赤酵母；分泌表达中图分类号：Q789 文章编号：1005—9830(2008)02—0252—05 ConstructionofHuman-like VectorandIts Collagen Expression inPichiaPastoris Expression GAO Li—hul，YANGShu—linl，CHUWei．hua2，LIXin—zhul， NIU Yanl Xiao．son91，YANG ofChemical (1．School 210094，China； Engineering，NUST，Nanjing 2．SchoolofLifeScienceand Pharmaceutical Technology，ChinaUniversity，Nanjing210009，China) human—likemonomerie and tothe Abstract：A collagen gene(gel)isdesignedsynthesizedaccording characterof domain．whichismadeoftotal unique eollagenous up repeatof“Gly-X-Y”unit．Thegel inthesameorientationsixtimes isinsertedintotheEcoRl／Notlsites repeats forming ploygene，which ofvector withaHIS4selectablemarker the throughdesignedadaptors．After validity pPIC9K verifying ofconstructionDNA recombinantvector is intothe