粉尘螨1类变应原T和B细胞表位嵌合基因的构建与表达.pdfVIP

·420 · 中国血吸虫病防治杂志 2014年第26卷第4期 ChinJSchistoControl2014，Vol.26，No.4 ［［文章编号文章编号］］）0202⁃⁃0505 ··论著论著·· 粉尘螨粉尘螨11类变应原类变应原TT和和BB细胞表位细胞表位 嵌合基因的构建与表达嵌合基因的构建与表达 * 徐海丰，徐朋飞，王克霞，李朝品 ［［摘要摘要］］ 目的目的 构建粉尘螨1类变应原（Derf1）的T和B细胞表位嵌合基因原核表达载体。方法方法 将Derf1包含的5个 T细胞表位（T1～T5）和６个B细胞表位（B1～B6），以B1⁃T1⁃B2⁃T2⁃B3⁃T3⁃B4⁃T4⁃B5⁃T5⁃B6和B1⁃B2⁃B3⁃B4⁃B5⁃B6⁃T1⁃T2⁃ T3⁃T4⁃T5连接方式直接合成表位嵌合基因，并分别命名为Derf 1A和Derf 1B。构建原核表达重组质粒pET⁃28a（+）⁃Der f 1A和pET⁃28a（+）⁃Derf 1B，双酶切及测序验证的阳性克隆转化到E.coliBL21（DE3）后诱导表达。SDS⁃PAGE分析表达 产物后进行纯化，并进行Westernblotting鉴定。ELISA法检测嵌合蛋白对粉尘螨过敏患者血清IgE抗体的结合力。结结 果果 双酶切及测序结果表明，成功构建了原核表达重组质粒pET⁃28a（+）⁃Derf 1A和pET⁃28a（+）⁃Derf 1B；SDS⁃PAGE分 析表明，Derf 1A和Derf 1B诱导并纯化成功，Westernblotting结果进一步证实纯化了Derf 1A和Derf 1B嵌合蛋白。与 Derf 1相比，Derf 1A和Derf 1B嵌合蛋白与粉尘螨过敏患者血清IgE抗体的结合能力显著降低（P均＜0.05），但Derf 1A 和Derf1B间差异无统计学意义（P＞0.05）。结论结论 成功表达了Derf1的T和B细胞表位嵌合蛋白，为粉尘螨过敏的特异 性免疫治疗奠定了基础。 ［［关键词关键词］］ 粉尘螨；粉尘螨1类变应原；T细胞表位；B细胞表位；免疫印迹试验 ［［中图中图分类号分类号］］ R384.4 ［［文献标识码文献标识码］］ A ConstructionandexpressionofachimericgenewithT⁃/B⁃cellepitopesofConstructionandexpressionofachimericgenewithT⁃/B⁃cellepitopesof majorallergengroupmajorallergengroup11fromfromDermatophagoidesfarinaDermatophagoidesfarina * XUHai⁃feng，XUPeng⁃fei，WANGKe⁃xia ，LIChao⁃pin DepartmentofPathogeny，BiologyofAnhuiUniversityofScienceandTechnology，Huainan232001，China *Correspondingauthor ［［AbstractAbstract］］ ObjectiveObjective ToconstructandexpressachimericgenewithT⁃/B⁃cellepitopesofthemajorallergengroup 1from Dermatophagoidesfarina （Derf1）.MethodsMethods Twochimericgenes，Derf1AandDerf 1B，weresynthesizedasB1⁃T1⁃B2⁃T2⁃ B3⁃T3⁃B4⁃T4⁃B5⁃T5⁃B6andB1⁃B2⁃B3⁃B4⁃B5⁃B6⁃T1⁃T2⁃T3⁃T4⁃T5pattens.Tworecomb