慢性应激抑郁模型大鼠脑内RES1mRNA表达水平的变化.docVIP

精品论文 参考文献 慢性应激抑郁模型大鼠脑内RES1mRNA表达水平的变化 何金花1 黎毓光1 刘誉2 (1广州市番禺中心医院 广东广州 510440) (2暨南大学医学院生化教研室 广东广州 510632) 【摘要】目的 观察慢性应激(chronic mild stress,CMS)抑郁模型大鼠局部脑区RES1（Ratts homolog of zebrafish ES1）mRNA表达水平的变化，结合行为学改变，探讨RES1基因在抑郁发生、发展中的作用及抑郁的发病机理。方法 将30只成年雄性大鼠随机分为对照组和慢性应激模型组，利用慢性不可预知的温和应激建立大鼠抑郁模型，正常对照组不予任何刺激，观察并比较两组大鼠行为学表现。提取大脑海马组织中的RNA，以GAPDH为内参照实时荧光定量RT-PCR方法检测大鼠大脑海马内RES1基因mRNA表达的改变。结果 与对照组相比，慢性应激模型组大鼠活动能力下降，兴趣丧失，与临床抑郁症的精神抑制症状相似。 模型组RES1 mRNA表达水平低于对照组，两组间差异显著具有统计学意义(plt;0.05)。结论 RES1基因表达下调可能与抑郁症的发生和发展有关。 【关键词】抑郁症 RES1基因 实时荧光定量RT-PCR 海马 【中图分类号】R965 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2012）12-0083-02 抑郁症的发病机制主要被认为是由于患者体内5-羟色胺、去甲肾上腺素和多巴胺等神经递质紊乱所致[1]。研究发现海马、前额皮质体积基因组学显示多个基因位点改变，没有找到单一的遗传模式[2]。这些观点都不能完全解释抑郁症的发病机制，也无从正确指导新的抗抑郁药物的开发和疾病的预防。人ES1基因定位于人的第21号染色体（C21orf33），mRNA序列全长为1.7Kb,编码的蛋白质含有238个氨基酸,与神经系统发育及精神病症有关 [3]。因此，关于ES1的功能还没有最后定论，这也是它值得深入研究的理由之一。目前国内外未见关于它与抑郁症关系的研究。本研究旨在探讨大鼠大脑海马神经细胞内ES1基因表达的改变，进一步揭示抑郁发病的机理。 1 材料和方法 1.1 材料 （1）实验试剂与仪器 TRIZOL试剂（Invitrogen 公司），M-MLV逆转录酶（Promaga），Taq酶（TaKala），琼脂糖（Biowest）,Genefinder染料（MBI公司），RealMasterMix(SYBR Green)北京天根，Beckman counlter u260紫外分光光度计，EPPendorf 梯度PCR仪（德国EPPendorf），Bio-Rud Pac200 电泳仪（美国），GDS-8000 凝胶成像分析系统（美国），Chromo400实时荧光检测系统（美国），Eppendorf 高速冷冻离心机（德国EPPendorf）。 （2）实验动物 成年雄性清洁级SD大鼠30只,体重250～300 g，购于中山大学医学院实验动物中心（许可证号：SYXK（粤）2007-0081）。实验前适应性饲养一周,其间自由进食、饮水,保持室内通风,室温维持在(20plusmn;2)℃，将大鼠随机分成对照组和实验组，每组15只，单笼饲养。造模前用敞箱实验(openfield test)进行行为学评分一次。 1.2 实验方法 （1）大鼠慢性应激抑郁模型的制备将明暗颠倒24h、4℃冰水游泳2min、水24h、停食24h、夹尾1min、30v电压电击足底5s、水平震荡5min(160Hz)、40℃环境5min、空瓶刺激以及噪声干扰，共10 种刺激随机安排到27日内，每日一种,每种刺激出现3次,同种刺激不能连续出现，使动物不能预料刺激的发生。对照组不予任何刺激，上述各组处理均至第27天，其间进行行为学实验，在第28天,即末次处理24小时后，对模型组和对照组进行各项指标的比较。 （2）行为学测定：用敞箱实验(openfield test)进行行为学评分.采用的敞箱为立方体,高为45cm，长宽各为90cm，周壁为黑色，底面由面积相等的30个方块组成以大鼠穿越地面方格块数为水平运动得分，大鼠穿越1格(3爪以上跨入)为1分；以直立次数(2个前爪腾空或攀附墙壁)为垂直运动得分，双足离地一次计1分；两者之和为敞箱总得分。每只大鼠进行1次，每次时间为3min，分别由两名实验人员记录两组大鼠清洁运动次数(大鼠做洗脸样动作)。测定时间为每天下午五时，持续进行3天的评分,并记录大鼠的死亡情况。 （3）实时荧光定量RT-PCR：总RNA的提取及逆转录反应大鼠断头处死,低温下分离左右端脑，取海马组织